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Analysen> Mikroskopische (bakterioskopische) Untersuchung eines Gram-gefärbten Abstrichs bei der Diagnose von infektiösen und entzündlichen Prozessen

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Schmiere auf die Flora von Frauen: Was bestimmt sie, die Rate und Pathologie

Abstrich auf Flora - oft von Gynäkologen Analyse ernannt. Was zeigt er und welche Missverständnisse gibt es auf seinem Konto?

Diese Analyse kann als "allgemein" bezeichnet werden. Dies ist die primäre Diagnose, die es dem Arzt ermöglicht, das Vorhandensein des entzündlichen Prozesses in der Vagina, der Harnröhre, dem Gebärmutterhalskanal zu bestätigen oder zu leugnen, und auch bestimmte Rückschlüsse auf die möglichen Wechseljahre oder klimakterischen Veränderungen beim Patienten zu ziehen.

  • mikroskopischer (bakterioskopischer) Gram-gefärbter Abstrich ist der offizielle Name;
  • ein Abstrich von den Genitalien;
  • Bakterioskopie;
  • Mikroskopie.

Wird verwendet, um infektiöse und entzündliche Prozesse zu diagnostizieren. Bakterioskopie ermöglicht es Ihnen, Bakterien in den weiblichen Genitalien zu erkennen: die einfachsten Mikroorganismen - Gonokokken, provozieren Gonorrhoe, Trichomonas - der Erreger der Trichomoniasis. Ein Spezialist im Mikroskop sieht auch einige Bakterien, Pilze (Candida), Schlüsselzellen (ein Zeichen für bakterielle Vaginose). Die Art des Mikroorganismus wird durch seine Form, Größe und auch, ob er mit einem Farbstoff angefärbt wird oder nicht, das heißt gram-positiv oder gram-negativ, bestimmt.

Zusätzlich wird in einem Abstrich von jedem Punkt (entnommen aus der Vagina, der Harnröhre, dem Gebärmutterhalskanal) die Anzahl der Leukozyten im Gesichtsfeld berechnet. Je mehr von ihnen - desto ausgeprägter ist der Entzündungsprozess. Geschätzte Menge an Epithel und Schleim. Flachepithel ist besonders häufig bei Frauen im gebärfähigen Alter während der Periode des Eisprungs - in der Mitte des Menstruationszyklus.

  • vaginale Candidiasis (Soor);
  • bakterielle Vaginose (früher als Gardnerellose bezeichnet);
  • Gonorrhoe;
  • Trichomoniasis.

Wenn es keine eindeutigen Anzeichen für eine dieser Krankheiten gibt, aber ein Abstrich schlecht ist, wird eine gründliche Untersuchung des Materials durchgeführt - Rückstau wird durchgeführt.

Gründe für die Aussaat in der Gynäkologie

  1. Wenn es eine moderate oder große Anzahl von Leukozyten in einem Abstrich gibt, ist der Erreger der Infektion jedoch nicht bekannt. Seit der Mikroskopie gibt es eine untere Grenze für den Nachweis von Mikroorganismen: 10 bis 4 - 10 bis 5 Grad.
  2. Wenn eine Mikrobe nachgewiesen wird, um ihre Empfindlichkeit gegenüber Antibiotika zu bestimmen.
  3. Wenn Anzeichen einer Pilzinfektion vorliegen. Um die Art der Pilze genau zu bestimmen und eine wirksame antimykotische Droge zu verschreiben.

Andere Arten von Pilzen Candida kann nicht behandelt werden, wenn keine pathologischen Symptome vorliegen.

Wenn Schlüsselzellen gefunden werden (Anzeichen einer bakteriellen Vaginose), sind aber auch andere Mikroben vorhanden. Zur Identifikation.

Was sind die Unterschiede zwischen Rückstau, Abstrich auf Flora und dem Reinheitsgrad der Vagina?

In der Forschungsmethode. Bei einem allgemeinen Abstrich wird das auf einem Glasstück abgelagerte Material mit speziellen Farbstoffen angefärbt und unter einem Mikroskop betrachtet. Und wenn bakteriologische (Bacpericulture-, Kultur-, mikrobiologische) Forschung durchgeführt wird, wird sie zuerst auf einem Nährmedium "ausgesät". Und dann, nach ein paar Tagen, schauen sie unter ein Mikroskop - welche Mikroorganismenkolonien gewachsen sind.

Das heißt, wenn wir über Express-Analyse sprechen, werden Sie nur eine Meinung über die Anzahl der Leukozyten, Epithel und Schleim erhalten. Aussaat ist nicht dringend

Auch mit der Mikroskopie können Sie schnell den Reinheitsgrad aus der Vagina bestimmen. Hier beurteilt der Arzt nur den Zusammenhang zwischen normaler, bedingt pathogener und pathogener Mikroflora.

Klassische Beurteilung der Reinheit der Vagina.

Was Ärzte mit der Mikroskopie nicht sehen

  1. Schwangerschaft Um es zu bestimmen, wird ein Abstrich nicht benötigt und egal welches Ergebnis es zeigen wird. Sie müssen eine Blutuntersuchung für hCG bestehen, sich einer gynäkologischen Untersuchung durch einen Arzt oder einer Ultraschalluntersuchung der Gebärmutter unterziehen. Sie können Choriongonadotropin im Urin nachweisen, nicht jedoch im Ausfluss aus den Genitalien!
  2. Krebs der Gebärmutter und des Gebärmutterhalses. Zur Diagnose einer malignen Entartung des Endometriums wird histologisches Material in großen Mengen benötigt. Und nehmen Sie es direkt aus der Gebärmutter mit separater diagnostischer Kürettage.

Gebärmutterhalskrebs und andere Pathologien (Erosion, Leukoplakie, Koilozytose, HPV-Schädigung, atypische Zellen, etc.) basieren auf den Ergebnissen einer zytologischen Studie. Diese Analyse wird direkt aus dem Gebärmutterhals entnommen, aus der Transformationszone, nach einer spezifischen Methode mit Papanicolaou-Färbung (daher der Name der Analyse - der PAP-Test). Es wird auch Onkozytologie genannt.

  • Zeigt solche Infektionen nicht an (zppp) als:
    • Herpes;
    • Chlamydien (Chlamydien);
    • Mykoplasmen (Mykoplasmose);
    • Ureaplasma (Ureaplasmose);
    • HIV
  • Die ersten vier Infektionen werden mittels PCR diagnostiziert. Und das Vorhandensein des Immunschwächevirus durch Abstrich mit hoher Genauigkeit ist unmöglich. Sie müssen einen Bluttest bestehen.

    Wie man sich auf die Analyse vorbereitet und wann sie benötigt wird

    Ein Arzt nimmt einen Abstrich von einem Patienten auf einem gynäkologischen Stuhl (unabhängig davon, ob sie schwanger ist oder nicht) mit einem speziellen Pinsel oder einem sterilen Löffel von Volkmann. Es tut überhaupt nicht weh und sehr schnell.

    Es ist technisch möglich, einen guten, sogar perfekten Abstrich zu erreichen, wenn Sie beispielsweise Ihre Vagina mit Chlorhexidin oder Miramistin reinigen. Aber was ist der Sinn?

    • Dusche;
    • Sex haben;
    • Verwenden Sie Vaginalhygieneprodukte, Intimdeodorants und Medikamente, wenn sie nicht von einem Arzt verordnet wurden;
    • einen Ultraschall mit einer vaginalen Sonde machen;
    • Kolposkopie durchführen.
    • bevor Sie einen Gynäkologen oder ein Labor für 3 Stunden besuchen, sollten Sie nicht urinieren.

    Spendenstriche brauchen Menstruationsblutungen. Selbst wenn es am letzten Tag der Menstruation nur einen "Daub" gibt, ist es besser, die Studie zu verschieben, da das Ergebnis wahrscheinlich schlecht sein wird - eine große Anzahl von weißen Blutkörperchen wird enthüllt.

    Alkoholkonsum ist nicht verboten.

    Kann ich einen Abstrich machen, während ich Antibiotika nehme oder direkt nach der Behandlung? Es ist unerwünscht, dies innerhalb von 10 Tagen nach der lokalen Wirkung der Medikamente (vaginal) und einen Monat nach der oralen Einnahme der antibakteriellen Mittel zu tun.

    Mikroskopische Untersuchung vorgeschrieben:

    • routinemäßig beim Besuch eines Gynäkologen;
    • bei Aufnahme in das gynäkologische Krankenhaus;
    • vor der IVF;
    • während der Schwangerschaft (besonders wenn ein Abstrich oft schlecht ist);
    • bei Beschwerden: ungewöhnlicher Ausfluss, Juckreiz, Beckenschmerzen usw.

    Interpretation der Ergebnisse: Was die Norm zu beachten und was - Pathologie in der Mikroflora

    Zunächst machen wir auf einen Tisch aufmerksam, in dem die Indikatoren des sogenannten ersten Reinheitsgrades angezeigt werden. Die Harnröhre wird darin nicht erwähnt (obwohl das Material auch von dort stammt), da es sich um gynäkologische Erkrankungen handelt. Der entzündliche Prozess in der Harnröhre wird von einem Urologen behandelt.

    Epithel - die Anzahl der Epithelzellen wird nicht gezählt, da sie keinen diagnostischen Wert hat. Aber zu wenig Epithel spricht von einem atrophischen Abstrich - das passiert bei Frauen während der Menopause.

    Leukozyten - werden im "Sichtfeld" betrachtet:

    • nicht mehr als 10 - eine kleine Menge;
    • 10-15 - mäßige Menge;
    • 30-50 - eine große Anzahl, bemerkt die Frau die pathologischen Symptome, und der Arzt während der Inspektion diagnostiziert den entzündlichen Prozess in der Vagina und (oder) am Gebärmutterhals.

    Mucus (Schleimstränge) - normalerweise sollte vorhanden sein, aber eine große Anzahl davon passiert mit Entzündung. In der Harnröhre sollte Schleim nicht sein.

    Bakterienflora oder gr lactomorphotypes - die Norm, es ist der Schutz der Scheide vor Keimen.

    Trichomonas, Gonokokken und Schlüsselzellen bei einer gesunden Frau im Gebärmutterhals und der Vagina sollten nicht sein. Candida ist auch abwesend. Zumindest in einer signifikanten Menge, die in der Analyse der Flora nachgewiesen wird.

    Eignung Abstrich ist nicht groß. Aber wenn eine Frau das Krankenhaus betritt, dann nehmen sie direkt bei der ersten Untersuchung im Stuhl frisch von ihr.

    Normalerweise sind die Ergebnisse 7-14 Tage gültig. Deshalb, wenn Sie es vor der Operation übergeben müssen, tun Sie es 3 Tage vor der Aufnahme ins Krankenhaus. Der letzte der zugewiesenen Tests.

    Was ist in bacposseve gefunden?

    Der Gynäkologe wird das Ergebnis der Kulturforschung am besten entziffern können. Aber Sie selbst, wenn Sie die Informationen unten lesen, vorläufig Ihre Analyse herausfinden.

    Die Anzahl der Mikroorganismen kann durch "Kreuze" ausgedrückt werden:

    • "+" Ist eine kleine Menge;
    • "++" ist ein moderater Betrag;
    • "+++" ist eine große Zahl;
    • "++++" - üppige Flora.

    Aber häufiger wird die Anzahl der Mikroflora-Vertreter in Grad ausgedrückt. Zum Beispiel: Klebsiella: 10 bis 4 Grad. Das ist übrigens einer der Vertreter von Enterobakterien. Gram negativer Stab, aerober Mikroorganismus. Einer der gefährlichsten Krankheitserreger, obwohl er nur opportunistisch ist. Dies liegt daran, dass Klebsiella gegen die meisten antibakteriellen Mittel resistent (resistent) ist.

    Im Folgenden beschreiben wir andere gebräuchliche Begriffe, die in den Ergebnissen einer Studie gefunden werden, oder Sie können von einem Arzt hören.

    Soor - ist Candida oder auf andere Weise - Soor. Es wird mit antimykotischen (antimykotischen) Medikamenten behandelt.

    Hefeähnliche Pilze Blastosporen und Pseudomyzel - Candidiasis oder eine andere Pilzkrankheit, in der Regel ähnlich wie Soor behandelt.

    Dimeroide - bedingt pathogene Mikroorganismen, nach den Ergebnissen der Forschung von Wissenschaftlern, sind bei den meisten Frauen etwa 10% der Mikroflora, sowie Streptokokken, Staphylokokken, E. coli, Gardnerella. Wenn die Flora gestört ist, nimmt ihre Anzahl zu.

    Leptotrix ist ein anaerobes gramnegatives Bakterium, das eine Leptotrichose verursacht. Lesen Sie mehr dazu in diesem Artikel.

    Gemischte Flora ist eine Variante der Norm, wenn es keine Symptome der Krankheit, vollständig Leukozyten oder ihre starke Zunahme (40-60-100) gibt. 15-20 ist eine Variante der Norm, vor allem während der Schwangerschaft.

    Enterokokken (Enterococcus) sind Vertreter der Darmmikroflora, die manchmal in die Vagina gelangen. Gram positive Kokken. Über Enterococcus fecalis (Enterococcus faecalis) haben wir früher geschrieben. Es gibt auch Enterococcus coli - E. coli. Normalerweise verursachen unangenehme Symptome bei einer Konzentration über 10 in 4 Grad.

    Pseudomonas aeruginosa ist ein gramnegatives Bakterium. Betroffen sind oft Menschen mit geringer Immunität. Es hat eine gute Resistenz gegen Antibiotika, was den Behandlungsprozess erschwert.

    Der polymorphe Bazillus ist ein häufiger Vertreter der vaginalen Biozönose. Wenn die Anzahl der Leukozyten normal ist und keine Beschwerden auftreten, sollte ihre Anwesenheit nicht stören.

    Die Erythrozyten - können in den kleinen Abrieben, besonders wenn es im Laufe des entzündlichen Prozesses oder wenn es klein war bemerkt werden.

    Coccus oder Kokkobakterienflora - in der Regel während eines infektiösen Prozesses in der Vagina oder am Gebärmutterhals. Wenn eine Frau Beschwerden hat, ist eine antibakterielle Behandlung erforderlich - vaginales Debridement.

    Diplococci ist eine Art von Bakterien (Kokken). In einer kleinen Menge bringen Sie keinen Schaden. Mit Ausnahme von Gonokokkov - Krankheitserreger Gonorrhoe. Sie wird immer behandelt.

    Als Schlussfolgerung werden wir häufige Abkürzungen anführen, die auf den Rohling der Analyseergebnisse geschrieben sind:

    • L - Leukozyten;
    • Ep - Epithel;
    • Pl. ep. - Plattenepithel;
    • Gn (gn) -Monococcus, der Erreger der Gonorrhoe;
    • Trich - Trichomonas, der Erreger der Trichomoniasis.

    Durch Grammausstrich

    Biologie und Medizin

    In Abhängigkeit von der Struktur der Zellwand werden Prokaryoten, die zu Eubakterien gehören, in zwei große Gruppen unterteilt. Es wurde gefunden, dass, wenn feste Eubakterienzellen zuerst mit Kristallviolett und dann mit Iod behandelt wurden, ein gefärbter Komplex gebildet wurde. Bei anschließender Behandlung mit Alkohol ist je nach Struktur der Zellwand das Schicksal des Komplexes anders: Bei den sogenannten grampositiven Spezies bleibt dieser Komplex in der Zelle erhalten, letztere verbleiben in gramnegativen Spezies gefärbt, im Gegenteil, der gefärbte Komplex wird aus den Zellen ausgewaschen und verfärbt sich. (Diese Methode wurde erstmals 1884 vom dänischen Wissenschaftler H. Gram (Ch. Gram) vorgeschlagen, der Gewebe färbte und später für Bakterien verwendete).

    In einigen Eubakterien ist eine positive Reaktion, wenn sie in der oben beschriebenen Weise gefärbt wird, nur für Zellen charakteristisch, die sich in der Phase des aktiven Wachstums befinden. Es wurde gefunden, dass der gemalte Komplex auf dem Protoplasten gebildet wird, aber seine Retention durch die Zelle oder das Auslaugen von ihm während der nachfolgenden Verarbeitung mit Alkohol wird durch die strukturellen Merkmale der Zellwand bestimmt.

    Das Färben von Arzneimitteln erhöht die Empfindlichkeit der Mikroskopie, da ungefärbte Bakterien selbst mit einem Anstieg von 400-1000 schwer unterscheidbar sind.

    Differenzielle Gram-Färbung ist die häufigste, obwohl auch monochrome Färbung verwendet wird. Gramfärbung ermöglicht die Unterscheidung von Bakterien, deren dicke Zellwand fast vollständig aus Peptidoglykan (gram-positiv) besteht, von Bakterien, deren Zellwand neben einer dünnen Schicht aus Peptidoglykan eine äußere Membran aus Lipoproteinen und Lipopolysacchariden (gram-negativ) aufweist. Der Hauptfarbstoff (z. B. Kristallviolett) ist fest in der Wand der grampositiven Bakterien fixiert, erhält eine bläulich-schwarze Farbe und kann leicht mit Alkohol (oder Aceton) aus der Wand gramnegativer Bakterien ausgewaschen werden, wonach sie mit einem Kontrastfarbstoff (z. B. Safranin) in Rot gefärbt werden.

    Gram-Färbung ist bei der Untersuchung von Sputum-Abstrichen unentbehrlich. Wenn das Sputum korrekt aufgenommen wird, sind mindestens 25 Neutrophile und weniger als 10 Epithelzellen im Gesichtsfeld bei geringer Vergrößerung zu sehen. Eine größere Anzahl von Epithelzellen und eine Vielzahl von Bakterienarten weisen darauf hin, dass das Sputum mit dem Inhalt des Oropharynx kontaminiert ist. Obwohl es oft schwierig ist, die normale Mikroflora von pathogenen Bakterien zu unterscheiden, geben die Gram-Schmierflecken wertvolle Informationen, wenn dem pathogenen Bakterium irgendeine Indikation zur Verfügung steht (biologisches Signal). Zum Beispiel sind bei bakterieller Vaginose Epithelzellen, die mit grampositiven Bakterien punktiert sind, in einem Vaginalabstrich sichtbar.

    Mikroskopie von Fäkalienausstrich gram-gefärbt, als Screening-Studie verwendet. Wenn Neutrophile entdeckt werden, beginnen sie mit bakteriologischer Forschung und der Bestimmung von Toxinen, die von Clostridium difficile produziert werden.

    Gram-Färbung wird auch verwendet, um Bakterien und weiße Blutkörperchen in den Liquor-, synovialen, pleuralen und peritonealen Flüssigkeiten zu identifizieren. Die untere Grenze der Empfindlichkeit der Methode beträgt 10.000 Bakterien pro 1 ml.

    Um die Empfindlichkeit zu erhöhen, wird die Testflüssigkeit zentrifugiert und ein farbiger Schmierabstrich hergestellt. Dieser Vorgang wird als Anreicherungsmaterial bezeichnet. Es ist einfach und besonders wertvoll für den Nachweis von Bakterien und weißen Blutkörperchen in CSF und säurebeständigen Bakterien im Sputum.

    Referenzen:

    Methoden der allgemeinen Bakteriologie

    Die Technik der Malabstriche. Zum Färben von Ausstrichen werden Farblösungen oder Tintenpapier verwendet, wie von A.I. Blau. Leichtigkeit der Vorbereitung, Benutzerfreundlichkeit sowie die Fähigkeit, Tintenpapier für eine unbegrenzte Zeit zu speichern, waren die Grundlage für ihre breite Verwendung in verschiedenen Färbemethoden.

    Malstriche malen Papier. Ein paar Tropfen Wasser werden auf die getrocknete und fixierte Zubereitung aufgetragen, farbige Papiere von 22 cm werden gelegt, während der gesamten Färbezeit sollte das Papier feucht bleiben und fest an der Glasoberfläche haften. Beim Trocknen wird das Papier zusätzlich mit Wasser angefeuchtet. Die Dauer der Abstrichfärbung wird durch die Färbemethode bestimmt. Am Ende der Färbung wird das Papier vorsichtig mit einer Pinzette entfernt und der Abstrich wird mit Leitungswasser gewaschen und in Luft oder Filterpapier getrocknet.

    Färbeflecken mit Farbstofflösungen. Auf die getrocknete und fixierte Zubereitung wird Farbstoff mit einer Pipette in einer solchen Menge aufgetragen, dass er den gesamten Abstrich bedeckt. Wenn Abstriche mit konzentrierten Lösungen von Farbstoffen (Zielyas Karbolfuchsin, Karbolsenzian oder Kristallviolett) gefärbt werden, werden sie durch Filterpapier gefärbt, das die Farbstoffteilchen zurückhält: Ein Streifen Filterpapier wird auf einen fixierten Abstrich gegeben und die Farbstofflösung wird darauf gegossen.

    Für die mikroskopische Untersuchung werden präparierte Abstriche, getrocknet und fixiert, gefärbt. Die Färbung ist einfach und komplex. Einfache Färbung besteht darin, für einen bestimmten Zeitraum eine einzelne Farbe auf einem Strich aufzutragen. Meistens wird einfache Wasserfarbe verwendet, Alkohol-Wasser (1:10) Pfeiffer Fuchsin, Leffler Methylenblau und Safranin. Eosin wird als saurer Farbstoff nur dazu verwendet, das Zytoplasma von Zellen zu färben und den Hintergrund zu tönen. Saurer Magenta ist zur Färbung von Bakterien völlig ungeeignet.

    Bei der einfachen Färbung nehmen mikrobielle Körper die Farbe des verwendeten Farbstoffs so intensiv wahr wie die Zellkerne; gleichzeitig sind das Zytoplasma und der gesamte Hintergrund des Abstrichs (wenn es sich nicht um einen Abstrich aus einer reinen Kultur handelt) in der gleichen Farbe gemalt, aber etwas blasser. Fuchsin und Gentianaviolett sind intensivere Farben; Methylenblau Flecken viel blasser. Die Wahrnehmung von Farbe hängt nicht nur von den Eigenschaften der Farben ab, sondern auch von den Eigenschaften der zu färbenden Mikroben. Die meisten Mikroben sind leicht und schnell mit Wasser oder Alkohol-wässrige Lösungen von Farben gefärbt.

    Bei hart färbenden Mikroben (zum Beispiel Tuberkuloseerreger) oder deren Teilen (Sporen, Flagellen usw.) müssen intensivere (erzwungene) Färbemethoden angewendet werden.

    Es ist möglich, die Färbung zu erzwingen: a) durch Erhöhung der Färbefähigkeit der Grundfarben, b) durch Verlängerung des Färbeterms und c) durch Einlegen von Gurken.

    Um die Farbkraft zu erhöhen, wird die Farbe einer hohen Temperatur (Erhitzen) ausgesetzt, bis Dampf erscheint (sogar siedet). Durch Variieren des Erwärmungsgrades ist es möglich, unterschiedliche Grade an Farbstärke zu erhalten.

    Die Verlängerung der Wirkung der Färbelösung auf einen Gegenstand kann auch den Grad der Färbung in gewissem Maße verbessern.

    Beizmittel sind Substanzen, die das Eindringen von Farbstoff in Zellen erleichtern: Phenol, Tannin, Essig- und Chromsäure, Alkalien usw. Der Wirkmechanismus von Beizmitteln ist unterschiedlich: In einigen Fällen wirken Beizmittel auf Farbstoffe, in anderen auf die Fähigkeit der Zellen, die Wahrnehmung zu färben. Die Beizmittel wirken auf den Abstrich entweder vor der Einwirkung der Farbe (z. B. beim Einfärben der Flagellen) oder zusammen mit der Farbe (Phenol in Tsili fuchsin) oder nach der Einwirkung der Farbe (Lyugolevsky-Lösung in der Gram-Methode).

    Bei Streichfarben werden neben Farben auch sogenannte Bleich- oder Farbstoffe verwendet. Die letzteren dienen dazu, überschüssige Farbe von der gesamten mikrobiellen Zelle oder von einem Teil davon zu entfernen, wenn die Farbe zu stark beim Adsorbieren des Materials oder beim Neuanstreichen unter Verwendung von Wärme usw. ist.

    Die folgenden werden als Bleichmittel verwendet: Alkohol, 5% ige wässrige Lösung von Schwefelsäure, 20-30% wässrige Lösung von Salpetersäure, 3% ige Lösung von Salzsäure in absolutem Alkohol, usw.

    Um Ausstriche zu malen, ist es notwendig, auf dem Schreibtisch eine Reihe von Farblösungen in Flaschen (besser als orange Glas) mit Pipetten und Gummidosen zu haben. Fläschchen sollten mit den entsprechenden Bezeichnungen gekennzeichnet sein; Um eine schnelle Kontamination mit Farbetiketten zu vermeiden, wird empfohlen, sie mit geschmolzenem Paraffin (mit einem Pinsel) zu tränken. Farbvials werden in einen Holzstativblock gelegt (Abb. 2).

    Abb. 2. Flaschen für Farben

    Zum Abwaschen von Farben und Spülabstrichen wird eine Flasche mit einem Röhrchen auf einem Stand für destilliertes Wasser und eine Form (Ablaufbecher) mit einer Standbrücke für Abstriche benötigt. Der Brückenständer besteht aus zwei Glasröhren oder Stäben, die an den Enden mit Stücken von Gummiröhren verbunden sind. Die Breite des Ständers sollte kleiner als die Länge des Schlittens sein. Außerdem sind ein Alkohol- (oder Gas-) Brenner und eine Cornet-Pinzette für Objektträger zum Verschmieren erforderlich. Beim Heizen wird der Objektträger mit einer Pinzette gegriffen und für eine gewisse Zeit über der Flamme gehalten. Bei längerem Einfärben verwenden sie Küvetten oder kleine Tassen, in die sie Farbe gießen und darin eintauchen. Bei der gleichzeitigen Bemalung mehrerer Abstriche in der Küvette, um ein Zusammenkleben der Gläser zu verhindern, werden sie mit der verschmierten Seite nach außen zusammengefügt und mit aus den Tuben geschnittenen Gummiringen verstärkt. Nach dem Färben werden die Tupfer mit Wasser gewaschen und gründlich mit Filterpapier getrocknet.

    Die Arbeit der letzten Jahre hat die Möglichkeit aufgezeigt, die Lebensfähigkeit von hauptsächlich Sporen tragenden Mikroben während des Färbens zu erhalten. Daher ist eine ausreichende Fixierung der Hübe notwendig. Waschwasser (wenn gefärbt) sollte in ein spezielles Gefäß abgelassen werden, gefolgt von einer Neutralisation, das verbrauchte Filterpapier (nach dem Trocknen der Abstriche) sollte nicht entsorgt werden, sondern verbrannt werden, und die gebrauchten Abstriche sollten desinfiziert werden.

    Einfache Methoden zum Malen Abstriche

    Mit einer einfachen Lackiermethode werden ein paar Tropfen Alkohol-Wasser oder wässrige Farblösung 1-2 Minuten auf einen fixierten Abstrich gegossen; Fuchsin (1:10) oder Leffler Methylenblau wird am häufigsten für diesen Zweck verwendet. Dann wird der Lack mit destilliertem Wasser abgewaschen und der Schmierfilm zwischen zwei Streifen Filterpapier getrocknet. In der Regel Fuchsin (1:10) Farbe 10-30 Sekunden und Methylenblau - 2-10 Minuten. Fuchsinflecken schmieren intensiver, und wenn sie mit Methylenblau angefärbt werden, werden sanfte, elegantere Zubereitungen erhalten. Der Abstrich nach dem Trocknen mit Filterpapier muss vollständig trocken sein, da sich ansonsten, wenn die verbleibende Feuchtigkeit in Kontakt mit Zedernöl kommt, eine Emulsion bildet und die Mikroskopie zu einem dunklen Bild führt. Im Allgemeinen hängt die Dauer der Färbung von der Art und Qualität der Färbelösung, dem Grad der Anfälligkeit der Mikrobe für Verfärbung und der Dicke des Schlickers ab.

    Färbung von Muromtsev

    Bereite zwei Lösungen vor:

    Carbolsäure (kristallin)

    Nachdem die Farbe aufgelöst ist, werden beide Lösungen gemischt und durch einen Papierfilter filtriert. Farbe bleibt lange bestehen. Die Abstriche werden 15 bis 30 Sekunden lang durch Filterpapierstreifen gestrichen.

    Der Autor empfiehlt, eine Mischung aus Alkohol (80 Teile) und Formalin (20 Teile) für 3-10 Minuten herzustellen.

    Mit dieser Ausstrichfärbung in Mikrobenzellen werden Einschlüsse, Bipolaritäten, Kapseln und Sporen nachgewiesen. Das Verfahren eignet sich zur Färbung von Abstrichen aus Organen, Blut, Kulturen auf Medien mit nativem Protein und auf halbflüssigem Agar.

    Der Hintergrund der Droge von diesen Substraten ist rosa; Gewebezellen und mikrobielle Körper sind blau-blau gefärbt.

    Schwierige (differentielle) Abstrichmethoden

    Komplizierte Färbemethoden basieren auf den Eigenschaften der physikalisch-chemischen Struktur der Mikrobenzelle. Das Wesen dieser Methoden liegt in der Auswirkung auf den Abstrich von zwei Farbstoffen, von denen einer der Haupt- (Haupt-) Farbe ist, und der andere - der zusätzliche (Kontrast). Nach dem ersten Anstrich verfärbt sich der Abstrich und wird erst dann einer weiteren Färbung unterzogen. Eine Reihe von chemischen Reagenzien (Säuren, Alkalien, Alkohol, Aceton usw.) können als Bleichmittel verwendet werden. Das Waschen des Schmiermittels mit reinem Wasser ist ebenfalls ein rein mechanisches Bleichverfahren, das erfordert jedoch eine lange Zeit; außerdem ist die Verfärbung unvollständig. In Bezug auf bleichende Substanzen können Mikroben leicht in Gruppen eingeteilt werden und schwer zu bleichen. Nicht alle Arten von Mikroben sind für Bleichmittel gleichermaßen relevant; einige sind säure- und alkoholbeständig, andere sind nur säurebeständig. Schließlich widerstehen einige, zum Beispiel Sporen, den Wirkungen aller Bleichmittel kräftig und gehören zu der Gruppe der farbbeständigen.

    Komplexe Färbemethoden haben einen wichtigen differentialdiagnostischen Wert zur Charakterisierung der zu untersuchenden Mikrobe.

    Gram-Färbung

    Bei der Bearbeitung von Abstrichen (Sektionen) aus Organen und Geweben, die Mikroorganismen, Gentianaviolett und dann Jod enthalten, hat das schwarz gestrichene Präparat die Eigenschaft, unter Einwirkung von Alkohol zu bleichen. Gleichzeitig werden einige der im Abstrich enthaltenen Bakterien ebenfalls verfärbt, während andere violett werden. Mit zusätzlicher Färbung (insbesondere mit Pfeiffer's Fuchsin) werden mit Alkohol entfärbte Bakterien rot (gram-negativ) gefärbt. Andere, die die violette Farbe behalten (Jod + Gentianaviolett-Verbindung), die nicht mit Alkohol gebleicht sind, gehören zu der Gruppe der grampositiven Bakterien. Der Unterschied zwischen grampositiven und gramnegativen Bakterien hängt vom Unterschied ihrer isoelektrischen Punkte ab, und die Fähigkeit der grampositiven Bakterien, Farbe zu behalten, ist mit dem Vorhandensein des Magnesiumsalzes der Ribonucleinsäure verbunden, die gramnegative Bakterien nicht enthalten. Das Beste von allem ist, dass die Gram-Färbung erhalten wird, nachdem die Ausstriche durch eine physikalische Methode (Erhitzen) fixiert wurden. Die Eigenschaften der Haltung bestimmter Bakterienarten gegenüber verschiedenen Farben, insbesondere die Färbung nach der Gram-Methode, sind durch die sogenannten färberischen Eigenschaften von Mikroben gekennzeichnet.

    Maltechnik. Ein Abstrich von Filterpapier mit einer etwas kürzeren Grße und einem Objektträger wird auf einen mit Hitze fixierten Abstrich gelegt, und eine ausreichende Menge Kristallviolett-, Karbol- oder Anilin-Gentianaviolett-Lösung oder irgendeine andere violette Triphenylmethan-Farbe (zum Beispiel Methylviolett) für 1 bis 2 Minuten wird darauf gegossen. Dann wird die Farbe abgelassen, ein Streifen Filterpapier wird entfernt und die Lugol-Lösung wird ohne Waschen mit Wasser für 1-2 Minuten auf den Abstrich gegossen. Die Lösung wird abgelassen und entfärbt das Arzneimittel in 96 ° Alkohol für 30-60 Sekunden, gewaschen mit Wasser und gefärbt mit Pfeiffer's Fuchsin (oder mit Safranin, Neutralula oder Vesuvin verdünnt) für 2-3 Minuten. Dann wird die Farbe mit Wasser abgewaschen und der Abstrich mit einem sauberen Filterpapier getrocknet.

    Mikroskopisches Bild: Wenn Gram-Abstriche korrekt gefärbt sind, werden gram-positive Mikroben dunkelviolett und gramnegative Farben werden als zusätzliche Farbe gefärbt (z. B. Pfeiffers rosa Farbe von Fuchsin-Fuchsin).

    Verwenden Sie kein kontaminiertes Filterpapier. Es ist eine mechanische Übertragung von Mikroben von einem Abstrich auf einen anderen möglich, was sich auf die Ergebnisse der Mikroskopie auswirken kann. Die Dauer der Einwirkung von Farbe, Lugol-Lösung (Beize) und Alkohol hängt von der Dicke des Schmierfilms ab. Vor allem der entscheidende Punkt in der Gram-Färbung ist die Verfärbung des Abstrichs mit Alkohol. Bei kurzer Exposition gegenüber Alkohol werden überstrichene Präparate erhalten, und bei längerer Exposition verfärben sich alle Mikroben (einschließlich p-positiv). Bei einem dicken, dicken Abstrich (z. B. aus einer Agarkultur) sollte die Expositionszeit gegenüber Alkohol länger sein als ein dünner Abstrich, insbesondere bei Flüssigkulturen. Wenn sie in ihren dicken Teilen Alkohol auf einem ungleichmäßig vorbereiteten Abstrich ausgesetzt waren, blieben die Mikroben nicht verfärbt, und in dünnen verfärbten sie sich; Sie erhalten ein "buntes" Farbmuster, das zu falschen Schlussfolgerungen führen kann.

    Manchmal können gramnegative Bakterien in der Kultur grampositiver Bakterien beobachtet werden, die um so größer ist, je älter die Bevölkerung ist. Dies sind nichts anderes als bakterielle Leichen, die eine intrazelluläre Autolyse durchlaufen haben, wodurch die Zelle Magnesium-Ribonucinate verloren hat. Andererseits sind in sehr jungen Kulturen (mehrere Stunden Wachstum) der Familie der Enterobakterien gigantische, juvenile Formen dieser Bakterien, die 2-3 mal größer als Erwachsene (18-Stunden) sind, sehr basophil, da ihr Zytoplasma mit Ribonukleotiden überladen ist. Daher sind sie bei der Färbung durch Gram so intensiv mit Magenta gefärbt, dass sie bei schlechtem Licht als gram-positive vegetative Formen von Sporenstäbchen genommen werden können.

    Für Anfänger, wie auch in Zweifelsfällen, wird empfohlen, Kontrollpräparate auf demselben Glas zu präparieren, auf dem sich der Testausstrich befindet - einer aus einer Kultur von Mikroben, offensichtlich grampositiv, und der andere aus gramnegativen.

    Bei Verfärbung des Medikaments in Gramm farbigen Alkohol kann direkt auf den Abstrich gegossen werden, ständig schütteln das Glas. Es ist besser, die Verfärbung in Küvetten durchzuführen, in denen Alkohol gegossen wird, und mit der Pinzette von Cornet wird das Medikament angehoben und abgesenkt, wobei die Farbe des Alkohols beobachtet wird, der vom Glas herabfließt. Die Verfärbung gilt als abgeschlossen, wenn die aus dem Abstrich herabfließenden Alkoholtropfen in der Farbe dem Alkohol in der Küvette gleich werden; Normalerweise dauert es 10-30 Sekunden, abhängig von der Dicke des Striches.

    Alkohol 96 ° in Küvetten sollte öfter ersetzt werden (80 ° Alkohol differenziert den Abstrich nicht richtig). Verbrauchter Alkohol wird normalerweise aus Küvetten in Alkoholbrenner gegossen.

    Für Anfänger kann eine Verfärbung von Ausstrichen mit jodiertem Alkohol empfohlen werden. Es wurde festgestellt, dass wenn eine kleine Iodtinktur zu der Entfärbungsflüssigkeit hinzugefügt wird, sich Mikroben, die grampositiv gefärbt sind, in solch einer Flüssigkeit nicht für eine Stunde verfärben, und gramnegative sind in ungefähr 5 Sekunden gefärbt. Nach Savateev genügt es, 2-4 ml 10% iger Jodtinktur pro 100 ml 95 ° Alkohol zuzugeben; die Lösung kann für eine lange Zeit bestehen bleiben. Wenn Aceton anstelle von Alkohol verwendet wird, wird Iod Tinktur vor der Verwendung hinzugefügt.

    Zwei Minuten reichen aus, um Ausstriche mit jodiertem Alkohol zu entfärben, gefolgt von Waschen mit Wasser und zusätzlicher Pfeiffer-Fuchsin-Färbung.

    Ändern der Farbmethode von Gram

    Wie oben erwähnt, ist die Gram-Färbung die wichtigste Methode zur Identifizierung von Bakterien. Es ist theoretisch möglich, Bakterien in zwei Gruppen zu teilen: gram-positiv und gram-negativ; In der Realität gibt es Fälle, in denen die gleichen Bakterien als "grammselektierbar" charakterisiert werden. Seit die Methode 1884 von Christian Gram entwickelt wurde, wurden zahlreiche Gram-Farbmodifikationen veröffentlicht. Ein Abstrich von Bakterien zum Anfärben auf einem Glasobjektträger wird durch ein direktes Verfahren aus einer Kultur auf einem flüssigen oder festen Medium erhalten, aber es ist am besten, es aus einer Formalin-fixierten, gewaschenen Probe herzustellen. Ein paar zusätzliche Minuten, die zum Suspendieren von Bakterien in 5% (v / v) Formalin verbracht wurden, Sammeln und Waschen durch Zentrifugieren, zahlen sich aus, da Zellgröße und -form gut erhalten sind, Zellen gleichmäßig gefärbt sind und statistisch gestreute Präzipitate aus flüssigen Kulturmedien fehlen. In jedem Fall wird empfohlen, den Abstrich an der Luft zu trocknen und durch Erhitzen zu fixieren, wie bei einer einfachen Färbung. Es ist wichtig, die Gramm-Färbemethode zu standardisieren. Ähnliche Ergebnisse geben zwei weitere Färbemethoden - in der Modifikation von Hooker und in der Modifikation von Burke.

    Gram Färbung in einer Modifikation von Hooker.

    Lösung A zur Herstellung des Farbreagenzes:

    Kristallviolett (mit 90% Trockensubstanzgehalt)

    Ethanol 95% (v / v)

    Lösung B zur Herstellung des Farbreagenzes

    Die Lösungen A und B werden gemischt, um ein Kristallviolett-Färbereagens zu erhalten. 24 Stunden stehen lassen und vor Gebrauch durch Filterpapier filtern.

    Iod und Kaliumiodid werden in einem Mörser zerkleinert und Wasser wird langsam unter kontinuierlichem Mahlen zugegeben, bis das Iod gelöst ist. In einer dunklen Flasche aufbewahren.

    Lösungsmittel zum Bleichen:

    Ethanol 95% (v / v)

    Safranin O [2,5% (Gew./Vol.) 95% (v / v) Ethanol]

    Ein luftgetrockneter bakterieller Abstrich, der in der Hitze verschmiert wurde, wird für 1 Minute in eine Kristallviolett-Färbelösung eingetaucht.

    Der Abstrich wird in einem schwachen, abgewinkelten Strahl Leitungswasser für 2 Sekunden gewaschen.

    Der Ausstrich wird für 1 Minute in Jodbeizmittel gegeben.

    Es wird in einem schwachen, in einem Winkel verlaufenden Strom von Leitungswasser für 2 Sekunden gewaschen, wonach es mit Löschpapier getrocknet wird.

    Den Abstrich 30 Sekunden lang in 95% Ethanol eintauchen, wobei letzterer geschüttelt wird, wonach der Abstrich mit Löschpapier getrocknet wird.

    Tauchen Sie den Abstrich für 10 s in einen zusätzlichen Farbstoff.

    Der Abstrich wird in einem schwachen, abgewinkelten Strahl von Leitungswasser gewaschen, bis die Farbe in dem Abfluss verschwindet, wonach er mit Löschpapier getrocknet wird.

    Gram-Färbung in der Burke-Modifikation.

    Kristallviolett (mit 90% Trockensubstanzgehalt)

    Beizmittel auf die gleiche Weise wie für die Modifikation von Hooker vorbereitet.

    Lösungsmittel für Verfärbung: (Vorsicht, brennbar!)

    Safranin O (mit 85% Trockensubstanzgehalt)

    Der an der Luft getrocknete und durch Erhitzen fixierte Abstrich wird in Lösung A getaucht, 2-3 Tropfen Lösung B werden zugegeben und 2 Minuten inkubiert.

    Waschen Sie den Abstrich mit Jodbeize und bedecken Sie ihn dann für 2 Minuten mit einem frischen Beizmittel.

    Der Tupfer wird in einem schwachen, abgewinkelten Wasserstrahl aus dem Wasserhahn für 2 Sekunden gewaschen. Die Oberfläche um den Abstrich herum wird mit Löschpapier getrocknet, aber der Abstrich selbst wird vor dem Austrocknen geschützt.

    Ein Entfärbungslösungsmittel wird tropfenweise auf einen Abstrich mit einem geneigten Glasobjektträger aufgetragen, bis die Farbe aus dem Lösungsmittel, das aus dem Glas fließt, verschwindet. Danach wird der Abstrich an der Luft getrocknet.

    Die Gramm-Methode ist das. Was ist die Gram-Methode?

    Die Gram-Methode ist eine Methode der Färbung von Mikroorganismen für die Forschung, die eine Differenzierung von Bakterien nach den biochemischen Eigenschaften ihrer Zellwand ermöglicht. Es wurde 1884 vom dänischen Arzt G. K. Gram vorgeschlagen.

    Grambakterien gefärbt mit Anilinfarbstoffen - Enzian oder Methylviolett usw., dann wird der Farbstoff mit einer Jodlösung fixiert. Beim anschließenden Waschen der gefärbten Droge mit Alkohol werden solche Arten von Bakterien, die fest gefärbt sind, im Gegensatz zu gramnegativen Bakterien (Gram (-)) gram-positive Bakterien (bezeichnet durch Gram (+)) genannt, die sich beim Waschen verfärben.

    Verwenden Sie in der Diagnose

    Gramfärbung ist in der Systematik von Bakterien sowie für die mikrobiologische Diagnostik von Infektionskrankheiten von großer Bedeutung.

    Gram-positive Kokken (mit Ausnahme von Vertretern der Gattung Neisseria) und sporiferen Formen von Bakterien sowie Hefe, sind sie in einer bläulich-schwarzen (dunkelblauen) Farbe gemalt.

    Viele nebulöse Bakterien sind gramnegativ, sie werden rot, die Zellkerne werden leuchtend rot und das Zytoplasma ist rosa oder karmesinrot.

    Maltechnik

    Gram-Färbung bezieht sich auf eine komplexe Färbemethode, wenn ein Abstrich durch zwei Farbstoffe beeinflusst wird, von denen einer der Hauptbestandteil ist und der andere zusätzlich ist. Zusätzlich zu den Farbstoffen werden Bleichmittel für komplexe Färbemethoden verwendet: Alkohol, Säuren usw.

    Gramfärbungen verwenden häufig Anilinfarbstoffe der Triphenylmethangruppe: Enzian, Methylviolett oder Kristallviolett. Gram-positive Gram (+) Mikroorganismen ergeben eine starke Verbindung mit diesen Farbstoffen und Jod. Gleichzeitig verfärben sie sich nicht, wenn sie Alkohol ausgesetzt werden, wodurch Mikroorganismen bei zusätzlicher Färbung mit Fuchsin Gram (+) die ursprünglich angenommene violette Farbe nicht verändern.

    Gram-negative Gram (-) Mikroorganismen bilden eine Verbindung mit basischen Farbstoffen und Jod, die durch die Einwirkung von Alkohol leicht zerstört werden. Als Ergebnis werden die Mikroben verfärbt und dann mit Magenta angefärbt, wodurch eine rote Farbe erhalten wird.

    Materialvorbereitung für das Malen

    Das Testmaterial wird in einer dünnen Schicht über die Oberfläche eines gut entfetteten Objektträgers verteilt. Der präparierte Abstrich wird an der Luft getrocknet und nach vollständiger Trocknung fixiert. Histologische Schnitte werden durch eine Routinetechnik hergestellt, wobei Gewebestücke in Formalin fixiert und Paraffin eingegossen werden.

    Reparatur

    Beim Fixieren wird der Abstrich auf der Oberfläche des Objektträgers fixiert, und daher werden die mikrobiellen Zellen während des anschließenden Färbens des Präparats nicht abgewaschen. Darüber hinaus färben sich tote Mikrobenzellen besser als lebende Zellen.

    Es gibt eine physikalische Methode der Fixierung, die auf der Wirkung der hohen Temperatur auf die mikrobielle Zelle beruht, und chemische Methoden, die die Verwendung von Chemikalien beinhalten, die die Koagulation cytoplasmatischer Proteine ​​verursachen.

    Physikalische Fixierungsmethode

    Ein Glasobjektträger mit einer Vorbereitung wird mit einer Pinzette oder I und II Finger der rechten Hand an den Rändern mit einer Bürste nach oben genommen und mit einer sanften Bewegung werden sie 2-3 mal über den oberen Teil der Brennerflamme durchgeführt. Der gesamte Fixierungsprozess sollte nicht länger als 2 s dauern.

    Die Verlässlichkeit der Fixierung wird mit der folgenden Methode überprüft: Die schmierfreie Oberfläche des Objektträgers wird auf die Rückseite der linken Hand aufgebracht. Wenn der Abstrich richtig fixiert ist, sollte das Glas heiß sein, aber kein Brennen verursachen (70-80 ° C).

    Chemische Methode der Fixierung

    Methylalkohol, Aceton, eine Mischung von Nikiforov (eine Mischung aus Ethylalkohol 96% und Anästhesieether im Verhältnis 1: 1), Karnua Flüssigkeit (Ethylalkohol 96% - 60%, Chloroform 30%, Eisessig 10%), Alkohol -formal (40% Formalin 5 ml, Ethylalkohol 96 ° - 95 ml). Ein Glasobjektträger mit getrocknetem Abstrich wird 10-15 Minuten in einen Kolben mit einer Fixiersubstanz eingetaucht und dann an der Luft getrocknet. Fixation in Paaren von 40% Formalin für einige Sekunden wird ebenfalls verwendet.

    Schmierfärbungsprozess

    1. Auf einen fixierten Abstrich einen der basischen Farbstoffe für 2-3 Minuten gießen. Um Niederschlag zu vermeiden, wird es durch Filterpapier gefärbt.
    2. Die Farbe ablassen, vorsichtig das Filterpapier entfernen. Ein Ausstrich wird mit einer Lugol-Lösung oder einer Iodid-Lösung nach Gram (eine wässrige Lösung aus Kaliumiodid und kristallinem Iod in einem Verhältnis von 2: 1) für 1-2 Minuten gegossen, bis die Zubereitung geschwärzt ist.
    3. Die Lösung wird abgelassen, eine Spülung wird mit 96º Ethylalkohol oder Aceton gespült, gegossen und abgelassen, bis sich der Schmierfleck verfärbt und die abfließende Flüssigkeit klar ist (ungefähr 20-40-60 Sekunden).
    4. Waschen Sie das Glas vorsichtig in fließendem oder destilliertem Wasser für 1-2 Minuten.
    5. Zur Identifizierung der gramnegativen Bakteriengruppe werden die Präparate zusätzlich mit Fuchsin oder Safranin gefärbt (2-5 Minuten).
    6. In fließendem Wasser gewaschen und mit Filterpapier getrocknet.

    Technik Färbung von Bakterien in histologischen Schnitten Gram-Weigert

    1. Die entwachsten Abschnitte sind auf Wasser eingestellt.
    2. 20 Minuten in 1% iger Lösung von Pararosanilin oder basischem Fuchsin in 1% Essigsäure einfärben (die Farbstofflösung wird zum Sieden erhitzt, abgekühlt und filtriert).
    3. In 3 Schichten destilliertem Wasser gewaschen.
    4. Malen Sie 5 Minuten in 1% Kristallviolett in destilliertem Wasser.
    5. Schnell in 1% Natriumchloridlösung abspülen.
    6. 30 Sekunden in einer Mischung verarbeitet: 1 Teil Iod + 2 Teile Kaliumiodid + 100 Teile destilliertes Wasser.
    7. Blot mit Filterpapier.
    8. Unterscheiden Sie, indem Sie eine Mischung von gleichen Volumina Anilin und Xylol (1 - 2 ml) auf die Sektion auftragen; Die Lösungen werden abgelassen, bis die Farbwolken aufhören, sich von der Schicht zu entfernen.
    9. Wird nach 3 Xylol-Wechseln durchgeführt.
    10. In Balsam oder einem Harz in Xylol gelöst.

    Ergebnis: Gram-positive Bakterien sind blau-schwarz, violett Fibrin, Kerne sind rot.

    Siehe auch

    • Mikroorganismen färben
    • Anilin-Farbstoffe

    Links

    Auf Deutsch

    • Gram, HC (1884). "Über die Isolierung der Schizomyceten in Schnitt- und Trockenpräparaten". Fortschritte der Medizin 2: 185-89.

    Auf Englisch

    Mikrobiologische Forschungsmethoden

    Der Zweck der mikrobiologischen Forschung besteht darin, die ätiologische Rolle bestimmter Mikroorganismen im Falle einer Krankheit oder eines klinischen Syndroms festzustellen. Es sollte berücksichtigt werden, dass die Erreger von entzündlichen Prozessen der Organe des Fortpflanzungssystems als UPM - Vertreter der transienten Komponente der normalen Mikroflora der Vagina und andere Biotope, und absolute Erreger - die Erreger der STIs sein können. Eine solche Verbindung zwischen STIs und opportunistischen Infektionen (verursacht durch DMP) bestimmt die Notwendigkeit eines integrierten Ansatzes für die mikrobiologische Diagnostik.

    INDIKATIONEN

    Mikrobiologische Forschungsmethoden werden verwendet, um infektiöse Krankheiten zu bestätigen oder auszuschließen.

    Methode

    Regeln für die Aufnahme von klinischem Material

    Der Ausfluss aus der Harnröhre wird mit einer sterilen Einweg-Bakterienschleife aus Plastik mit einem Volumen von 1 μl oder einem dünnen Dacron-Tupfer auf einem Aluminiumdraht entnommen. Die äußere Öffnung der Harnröhre sollte mit einem Tupfer oder Wattestäbchen gereinigt werden. In Abwesenheit von sichtbaren Sekreten kann der Arzt eine leichte Massage der Harnröhre durchführen. Der Tampon / die Schlaufe wird 1-2 cm in die Harnröhre eingeführt und durch leichtes Drücken der Seiten- und Rückwände entfernt. Für mikroskopische und Immunfluoreszenzstudien wird das Material auf einen Glasobjektträger übertragen, indem ein Tampon gerollt oder eine Schleife mit leichtem Druckmaterial darüber bewegt wird. Für Kultur und PCR wird das Material in Röhrchen mit geeigneten Transportmedien gegeben.

    Äußere Genitalien, der Vorabend der Vagina: Abstriche, die mit sterilen Baumwoll (Dacron) -Tampons aus pathologisch veränderten Bereichen entnommen wurden; Bei Entzündung der großen Drüse des Vestibulums erfolgt eine Punktion, bei geöffnetem Abszess nehmen die Drüsen mit einem sterilen Wattestäbchen Eiter.

    Vagina: Nach dem Einsetzen des Spiegels und des Elevators wird der Ausfluss mit einem sterilen Wattestäbchen aus dem hinteren Fornix oder aus pathologisch veränderten Schleimhautabschnitten entnommen; Zum Zweck der Kultur wird der Tupfer in ein steriles Röhrchen gegeben und sofort ins Labor geschickt. Kann diese Anforderung nicht erfüllt werden, wird die entnommene Probe in ein Reagenzglas mit einem Transportmedium gegeben.

    Für die Mikroskopie wird die genommene Probe auf einen Glasobjektträger übertragen, wobei der Tampon auf allen Seiten des Glases gerollt wird, wobei versucht wird, das Material gleichmäßig zu verteilen, wobei die natürliche Interposition aller Komponenten der Biozönose erhalten bleibt; Der Abstrich wird an der Luft getrocknet, mit 96% iger Ethanollösung (2-3 Tropfen pro Abstrich bis zur vollständigen Verdunstung) fixiert, mit beschriftetem Glas und in einem geschlossenen Behälter zum Labor geschickt. Während der Kulturdiagnose der Trichomoniasis wird der entnommene Ausfluss sofort in ein Nährmedium gegeben und ins Labor transportiert.

    Zervix: Nach dem Freilegen des Gebärmutterhalses in den Spiegeln wird der vaginale Teil des Uterus vorsichtig mit einem mit steriler 0,9% Natriumchloridlösung oder Wasser befeuchteten Wattestäbchen behandelt, dann wird ein herkömmlicher Wattestäbchen sanft in den Gebärmutterhalskanal eingeführt, entlastet, der Tampon entfernt, ohne die Vaginalwände zu berühren. und setze es in ein Reagenzglas mit einem Transportmedium für die Kultur. Um Mikroskopie durch Immunfluoreszenz-Methode in verschiedenen Modifikationen, virologische Forschung oder PCR durchzuführen, wird das Material mit einer speziellen Bürste genommen, die in den Kanal nach dem Entfernen des Schleimpfropfens oder der Entnahme einer Probe für die Kultur eingeführt wird. Nachdem die Tamponbürste in den Gebärmutterhalskanal eingeführt wurde, wird sie mehrmals um 1-2 cm gedreht, um Zellabschürfungen zu erhalten, wobei jedoch Skarifikationen und Blutbestandteile auf dem Tampon vermieden werden. Das entnommene Material wird in Reagenzgläser mit einem geeigneten Transportmedium gegeben. Bei mikroskopischen und Immunfluoreszenzstudien wird die entnommene Probe sofort vom Tupfer auf einen Objektträger übertragen.

    Uterus: Material aus dem Uterus für die Forschung kann nur mit einem speziellen Gerät mit einer äußeren Beschichtung auf der Spritzenpumpe gewonnen werden. Unter Beachtung der Regeln der Asepsis, den Gebärmutterhalskanal passieren und in der Gebärmutter die äußere Membran der Spritze öffnen, dann den Inhalt aspirieren. Dann schließe die äußere Hülle und entferne die Sonde aus dem Uterus.

    Gebärmutteranhangsgebilde: Material aus der Infektionsquelle kann nur mit chirurgischem Eingriff (Eiter, Exsudat, Biopsiematerial) oder bei diagnostischer Punktion von tumorähnlichen Gebilden im Becken durch das Vaginalgewölbe erhalten werden (mögliche Kontamination der Probe mit vaginaler Mikroflora in Betracht ziehen). In einigen Fällen, wenn die Infektionsstelle in den Gebärmutteranhangsgebilden mit der Gebärmutter in Verbindung steht, können wiederholte Untersuchungen des Gebärmutterhalskanals nützlich sein, wenn die Ergebnisse der Studie vom gleichen Typ sind. Urin: Nach gründlicher Spülung der äußeren Geschlechtsorgane wird ein mittlerer Teil des morgens freigesetzten Urins in einer Menge von 5-10 ml in einem sterilen Behälter gesammelt. Wenn man bedenkt, dass im Urin enthaltene Mikroorganismen sich bei Raumtemperatur zu vermehren beginnen, muss die Probe innerhalb von 1-2 Stunden an das Labor geliefert werden, um falsche Ergebnisse bei der Quantifizierung des Grades der Bakteriurie zu vermeiden. Wenn es nicht möglich ist, diese Anforderung zu erfüllen, ist es möglich, die Urinprobe bei einer Temperatur von 4 ° C in einem Kühlschrank für nicht mehr als 12 Stunden zu lagern.

    Blut: Blutkultur (Nachweis von Bakteriämie) ist notwendig, wenn Sie die Entwicklung eines systemischen Entzündungssyndroms vermuten. Anhaltende Hyperthermie, Schüttelfrost, Unterkühlung, Leukozytose, Zeichen einer Multiorgan-Dysfunktion dienen als kategorische Indikationen für die mikrobiologische Untersuchung von Blut. Blutproben werden so früh wie möglich genommen, vom Beginn des Fiebers 2-3 mal im Abstand von 30-60 Minuten von den peripheren Venen der oberen Extremitäten (die Blutabnahme in der Höhe des Fiebers erhöht die Sensitivität der Methode nicht, die optimale Blutmenge wird wichtiger für das Erkennen der Ätiologie der Krankheit). Optimale Verwendung handelsüblicher Flaschen mit vorbereiteten Nährmedien zur Kultivierung aerober Mikroorganismen und strikter Anaerobier. Besonderes Augenmerk auf die Einhaltung der Regeln der Asepsis: Die Haut an der Venenpunktionsstelle wird mit einer 1-2% igen Lösung von Iod oder Povidoniod behandelt, wobei mindestens eine Minute lang Bewegungen von der Mitte zur Peripherie erfolgen. Nach der Desinfektion ist eine Palpation der Venenpunktionsstelle nicht akzeptabel. Unmittelbar vor der Punktion der Vene wird die Haut mit einer 70% igen Ethanollösung behandelt. Die Manipulation erfolgt in sterilen Handschuhen. Kunststoffkappen werden von den Flaschen entfernt, Gummistopfen werden mit 70% iger Ethanollösung abgewischt. Nachdem sie Blut aus einer Vene genommen haben, wechseln sie die Nadel und stechen, indem sie einen Gummistopfen durchstechen, Blut in die Ampulle (ungefähr 10 ml Blut sind in jeder der beiden Ampullen). Bei Kindern unter 1 Jahr nehmen Sie 0,5-1,0 ml Blut in einer Flasche. Bei Kindern im Alter von 1 Jahr bis 6 Jahren beträgt die Gesamtmenge an entnommenem Blut 1 ml pro Lebensjahr, und dieses Volumen wird auf zwei Flaschen verteilt. Bei Kindern und Erwachsenen mit einem Gewicht von 30 bis 80 kg werden 10-20 ml Blut zwischen zwei Ampullen verteilt.

    Die Entnahme einer Probe aus der peripheren Vene und der anderen aus dem Katheter ist nur in Ausnahmefällen zulässig: ggf. Identifizierung der katheterassoziierten Bakteriämie oder bei objektiven Schwierigkeiten im Zusammenhang mit der Venenpunktion.

    Mikroskopische Studie von klinischen Proben

    Eine wichtige Phase der mikrobiologischen Forschung bei der Diagnose von STIs und opportunistischen Infektionen. Damit können Sie eine vorläufige Bewertung der qualitativen und quantitativen Zusammensetzung der Mikroflora im pathologischen Fokus schaffen, um die Qualität des Einfangmaterials beurteilen (entsprechend seiner Stelle der Entzündung, wie das Vorhandensein des vaginalen Epithels in Abstrichen aus dem Gebärmutterhalskanal genommen, stellt es eine Verletzung der Auswahlregeln Biotests) sowie die Mikroorganismen zu identifizieren, wachsen nicht auf normalen Nährmedien (Gonokokken, Trichomonaden, streng anaerobe Bakterien).

    Die Empfindlichkeit der Methode der Lichtmikroskopie ist auf dem Niveau des Nachweises von Mikroorganismen in der Menge von 4-5 lg CFU / ml und mehr. Daher können in einigen Fällen ätiologisch signifikante Mikroorganismen mikroskopisch nachgewiesen werden. Dies bezieht sich in erster Linie auf strikt anaerobe Bakterien, die in der Regel wenig pathogen sind, deren ätiologische Rolle sich nach Akkumulation in der Infektionsquelle auf hohem quantitativen Niveau manifestiert. Unter Berücksichtigung der Originalität der Morphologie vieler Arten strenger Anaerobier (Bacteroid predotela, Fuzobakterii, Mobilunkus, Veylonella, Leptotrii) sowie mikroaerophiler Gardnerella dient ihr Nachweis in gram-gefärbten Abstrichen der Entlassungsvagina als Beweis für ihre ätiologische Rolle. Von grundlegender Bedeutung ist die Mikroskopie von Vaginalabstrichen bei der Diagnose von bakterieller Vaginose und anderen vaginalen Infektionen.

    Die Mehrheit der optionalen anaeroben DIMs hat jedoch keine morphologische Originalität, und ihr Grad an Pathogenität und Empfindlichkeit gegenüber Antibiotika ist im Gegensatz dazu äußerst unterschiedlich. Für diese Gruppe wird daher UPM-Kulturforschung notwendig. Auch Diagnose von bakterieller Vaginose, mikroskopische Methode hat den Vorteil gegenüber der Kultur Untersuchung für die Diagnose von relativ selten im fortpflanzungsfähigen Alter vaginal Zuständen Mikroökologie: Cytolytische Vaginose, Zwischenform microcenosis, Vaginalepithel Atrophie (letztes Merkmal des Menopause Alters).

    Die Diagnose der vulvovaginalen Candidiasis kann am häufigsten durch Abstrichmikroskopie einer abnehmbaren Vagina durchgeführt werden, um in gefärbten oder nativen Ausstrichen der Elemente des Pilzes nachzuweisen: Knospungshefezellen, Fragmente von Pseudomyzel mit Blastosporen. Der Nachweis von Pilzelementen in Abstrichen weist auf eine große Anzahl von ihnen hin (mehr als 4-5 lg KBE / ml) und wird meist von einer ausgeprägten Leukozytenreaktion in einem Vaginalabstrich und klinischen Manifestationen des Entzündungsprozesses in der Vagina begleitet, was die klinische Diagnose einer vaginalen Candidiasis bestätigt.

    In der Labordiagnose der Gonorrhoe wird zunächst eine Mikroskopie von Abstrichen aus der Urethra und dem Zervikalkanal durchgeführt (wenn keine Hinweise auf andere Lokalisationen vorliegen: Pharynx, Konjunktiva, Rektum). Sie sollten versuchen, parallel für 2 Schläge von jedem Locus zu tun, um blau und Gram zu färben. Bei akuten gonorrhea durch das Fehlen oder spärlichen Anzahl der Vertreter der normalen Mikroflora (Lactobazillen) gekennzeichnet, eine große Anzahl von neutrophilen Leukozyten und der Anwesenheit von gramnegativer Diplokokken innerhalb Leukozyten (das Phänomen unfertige Phagozytose) und ohne Leukozyten angeordnet sind. Die chronische Gonorrhoe ist durch die Anwesenheit verschiedener Mikroflora zusammen mit gramnegativen Diplokokken innerhalb und außerhalb von Leukozyten und einer großen Anzahl von Neutrophilen gekennzeichnet. Meistens kann die Diagnose von Gonorrhoe auf der Grundlage von Mikroskopie von Gram-Abstrichen gemacht werden. Allerdings, schwangere Frauen, Jugendliche und Kinder definitiv Kulturwissenschaften mit Artbestimmung von Neisseria gonorrhoeae aus nicht-pathogener Neisseria zu unterscheiden, die Bestandteile von normalen vaginalen Mikroflora bei Mädchen erkennen, und im Fall von Material aus dem Mund-Rachenraum einnehmen, sollen sich von der großen Zahl von Arten von nicht-pathogener Neisseria in diesen Abstrichen in jedem bewusst sein, Alter

    Die mikroskopische Methode bleibt zur Zeit die wichtigste in der Diagnose der urogenitalen Trichomoniasis. Führen Sie eine Untersuchung des nativen Arzneimittels und / oder Farbabstrichs durch. Mikroskopie der einheimischen Droge, ist es wichtig zu erinnern, dass frisches Material (abnehmbare Urethra, Vagina) untersucht werden soll - in der Vorbereitung zeigen sie lebende, bewegliche Trichomonas. Bereiten Sie dazu das Präparat nach der Methode des "zerkleinerten" Tropfens (Entnahmedurch Zugabe von warmer 0,9% iger Natriumchloridlösung nahe der Körpertemperatur bedeckt mit einem Deckglas) oder "hängenden" Tropfens (die Suspension aus den entnommenen Exkreten wird in die Vertiefung des Glasobjektträgers gegeben) und mikroskopisch vor bei 400-facher Vergrößerung, wenn der Kondensator abgesenkt ist. Aus diesem Material werden Zubereitungen zum Färben mit Methylenblau, Gram oder Romanovsky - Giemsa hergestellt. Die Diagnose wird auf der Grundlage der Identifizierung von typischen Formen von Trichomonas vaginalis in Ausstrichen festgestellt.

    Bei der Auswertung der Ergebnisse der Vaginalabstrich-Mikroskopie sollte man auf folgende Punkte achten:

    • Zustand des Vaginalepithels: dominiert von den Zellen der Oberfläche, Zwischen- oder Parabasalschicht; das Vorhandensein sogenannter "Schlüssel" -Zellen - oberflächliche Epithelzellen dicht mit kleinen daran haftenden gramvariablen Stäbchen, die die Zellgrenzen verdecken (Abb. 6-1) oder "false-key" -Zellen - erhöhten die Adhäsion epithelialer Gram-positiver Stäbchen, meist Laktobazillen ( Abb. 6-2);
    • die Leukozytenreaktion: ihre Anwesenheit, die Schwere, die Erscheinungsformen der Phagozytose, ihre Vollendung;
    • Zusammensetzung der Mikroflora: quantitative und qualitative Bewertung nach Morphotypen und Farbeigenschaften.

    Abb. 6-1. Falsche Schlüsselzellen (Gram-Abstrich-Mikroskopie).

    Abb. 6-2. Normotsenose (Mikroskopie von Gram-Abstrich). Die Auswertung der mikrobiellen Gesamtkontamination erfolgt an einem 4-Punkt-System (Nugent-Kriterien, etwas modifiziert von uns) - nach der Anzahl der Mikrobenzellen, die im selben Sichtfeld während der Mikroskopie mit Immersion nachgewiesen wurden:

    + - bis zu 10 Mikrobenzellen im Sichtfeld - die Mindestanzahl; ++ - von 11 bis 100 Mikrobenzellen im Sichtfeld - eine moderate Anzahl; +++ - von 100 bis 1000 mikrobiellen Zellen im Sichtfeld - eine große Anzahl;

    ++++ - mehr als 1000 mikrobielle Zellen im Sichtfeld - eine gewaltige Menge.

    Die qualitative Beurteilung der vaginalen Mikroflora beinhaltet die Differenzierung aller Morphotypen nach ihren färberischen Eigenschaften und morphologischen Merkmalen. Es gibt Morphotypen von Laktobazillen, Fusobakterien, Bakterioiden, mobilunkusov, Leptotrichia, Weillonellus, Gardnerella, sowie grampositive Kokken, coliforme Stäbchen, Hefepilze. Trichomonas und andere Parasiten können im Abstrich gefunden werden.

    Bei Verdacht auf Syphilis haben Dunkelfeldmikroskopie von ablösbaren Erosionen und Ulzera und das Verfahren der direkten Immunfluoreszenz unter Verwendung der AT-Diagnostik von T. pallidum ihren diagnostischen Wert nicht verloren. Diese Methoden werden bei klinischen Symptomen auf der Haut und Schleimhäuten, die der Syphilis verdächtigt werden, angewendet. Darüber hinaus können Präparate für die Mikroskopie aus punktförmigen regionalen Lymphknoten, Zerebrospinalflüssigkeit, Fruchtwasser hergestellt werden. Erozivnoyazvennuyu Oberfläche vorsichtig (um nicht Blute zu empfangen) wurde gereinigt, wobei ein Mulltupfer Verwendung angefeuchtet 0,9% Natriumchloridlösung, dann vorsichtig Öffnen und Schließen der zwei Finger Basisgeschwüre / Erosionen, stimuliert die Sekretion von seröser Flüssigkeit, die bakteriologische Schleife nehmen oder sanft Aufbringen erosive Oberfläche Glasrutsche. Der resultierende seröse Ausfluss wird mit einer gleichen Menge an 0,9% iger Natriumchloridlösung gemischt, die mit einem Deckglas bedeckt ist, und das native Präparat wird mikroskopiert, um das Pathogen für eine Anzahl charakteristischer morphologischer Anzeichen und Art von Bewegungen zu detektieren. Bestimmte Erfahrungen sind erforderlich, um in der Mikroskopie das bleichte Treponema von Treponemen des Urogenitaltraktes zu unterscheiden.

    Zielgerichteter kann die Diagnose von Präparaten für die Mikroskopie mit direkter Immunfluoreszenz sein. In diesen Fällen wird die von einem Glasobjektträger aus beliebigen Gewebsflüssigkeiten entnommene Oberfläche der pathologischen Bereiche (einschließlich Autopsie-Material) in Luft getrocknet, mit Ethanol oder Methanol fixiert. Danach wird ein Anti-Treponemal-Globulin, spezifisch für T. pallidum, auf das Präparat aufgebracht. Mikroskopische Untersuchung des Mittels wird durch eine hellgrüne spezifische Fluoreszenz nachgewiesen.

    Immunolumineszenz-Methode - die Haupt- und in der Labordiagnose von HG, während in der Vorbereitung des pathologischen Materials Ag-Virus nachgewiesen wird. Üblicherweise wird die Methode der direkten Immunfluoreszenz verwendet, die es ermöglicht, beide Typen von HSV und die HSV1- und HSV2-Serotypen getrennt zu bestimmen. Die Sensitivität und Spezifität der Methode hängt von der Qualität der verwendeten diagnostischen Kits ab. Das Material für die Studie ist normalerweise die Flüssigkeit aus den geöffneten Vesikeln, der Ausstoß von erosiven Oberflächen der Haut und der Schleimhäute oder Kratzen von den Wänden des Zervikalkanals (mit einer latenten Infektionsform). Das Material wird mit einer bakteriologischen Schleife oder einem speziellen Tupfer entnommen und auf eine Glasplatte übertragen.

    Bei Urogenital-Chlamydien ist der Nachweis von Ar-Chlamydien mittels Immunfluoreszenz-Mikroskopie eine der führenden Labordiagnostik-Methoden. Üblicherweise wird eine direkte Immunfluoreszenz verwendet, bei der monoklonale Antikörper auf verschiedene Chlamydia Ag - Lipopolysaccharide (Gruppe), die Hauptproteinspezies der äußeren Chlamydia-Membran, und Antikörper gegen die rekombinante Ag-Chlamydia angewendet werden. Die Qualität der Diagnostik bestimmt den Grad der Sensitivität der Methode. Für die Beurteilung der Ergebnisse der direkten Immunfluoreszenz ist die Qualität der Materialaufnahme von großer Bedeutung: In einem Abstrich auf dem Glas einer aus dem Zervikalkanal entnommenen Probe sollten zylindrische Epithelzellen vorhanden sein und es sollten keine Plattenepithelzellen, Erythrozyten und Leukozyten vorhanden sein. Das Ergebnis gilt als positiv, wenn in den Abstrichen eines abnehmbaren Mikroskops mit einem Fluoreszenzmikroskop auf einem orange-braunen Hintergrund von Epithelzellen mindestens 5 Elementarkörperchen mit einer Zunahme von 100 gefunden werden. Wegen möglicher falsch-positiver Ergebnisse wird diese Methode nicht für die Untersuchung von Materialien empfohlen, die aus dem Nasopharynx und Rektum stammen.

    Kulturelle Forschung

    Die Methode der Anzucht und Isolierung von Reinkulturen von Krankheitserregern dient als "Goldstandard" der mikrobiologischen Diagnostik. Neben der Mikroskopie ist die Kulturforschung die wichtigste Methode zur Diagnose von Gonorrhoe, Trichomoniasis, Chlamydien. Molekulare und biologische Forschungsmethoden sind noch nicht spezifisch genug, um zu erkennen, dass diese STI-Erreger klassische Methoden ersetzen, aber ihnen gehört zweifellos die Zukunft. Eine andere Situation hat sich mit opportunistischen Infektionen des Genitaltraktes ergeben, deren Anzahl im Zeitalter der Antibiotika und der Verstädterung des gesellschaftlichen Lebens stetig zunimmt, deren ätiologische Struktur und Empfindlichkeit gegenüber Antibiotika sich dynamisch verändert. Häufige Antibiotikaresistenzen dieser Mikroorganismen führen zum Versagen der Behandlung, weshalb eine adäquate Wahl einer rationalen etiotropen Therapie unter modernen Bedingungen als ein ständiges klinisches Problem erkannt wird.

    Es ist bekannt, dass die Erreger entzündlicher Prozesse der Geschlechtsorgane eine Vielzahl von UPM sein können, die normalerweise Teil der transienten Komponente der ursprünglichen (normalen) Mikroflora der Vagina und benachbarter Biotope sind. Ihre pathogenen Eigenschaften manifestieren sich nur unter bestimmten Bedingungen, Störungen der Immunhomöostase des Makroorganismus und lokaler Kolonisationsresistenz. Unter diesen Bedingungen sollte die mikrobiologische Diagnostik die mögliche ätiologische Rolle einer Vielzahl von Krankheitserregern berücksichtigen, und nicht nur irgendeines spezifischen Erregers, wie bei der Diagnose von klassischen Infektionskrankheiten, die durch absolute Krankheitserreger verursacht werden. Die Aufgabe der Studie ist nicht nur die Identifizierung von Mikroorganismen, die im pathologischen Material gefunden werden, sondern auch die Begründung für ihre ätiologische Rolle im Entzündungsprozess bei diesem Patienten. Daher ist es beim Ausbringen von klinischem Material, insbesondere von Loci und normalerweise mit Mikroflora, sehr wichtig, die vielseitigsten Nährmedien zu verwenden, die zum Kultivieren einer großen Anzahl von Mikroorganismen geeignet sind. In diesem Fall ist es notwendig, die quantitativen Verhältnisse des Wachstums verschiedener Arten von Mikroorganismen in der primären Aussaat zu berücksichtigen, da der wahre Erreger am häufigsten die dominierende Rolle unter den Partnern spielt. Es gibt jedoch Arten, die in geringer Menge pathogene Eigenschaften aufweisen (Streptokokken der Gruppen A und B, Proteus, Klebsiella, Staphylococcus aureus, Listeria usw.).

    Die mikrobiologische Diagnostik opportunistischer Infektionen der Vagina basiert auf einer integrierten Bewertung der Ergebnisse mikroskopischer und kulturwissenschaftlicher Studien. Zur gleichen Zeit wird die streng anaerobe Mikroflora-Komponente durch Mikroskopie von Gramm bewertet - eine große Anzahl von anaeroben Morphotypen, die durch Lichtmikroskopie nachgewiesen wurden (ihre Anzahl in der abnehmbaren Vagina überschreitet 6 lg CFU / ml) zeigt ihre ätiologische Rolle an. Gleichzeitig hat die Bestimmung der Empfindlichkeit von Anaerobiern gegen Antibiotika derzeit keine klinische Zweckdienlichkeit, da die überwiegende Mehrheit von ihnen sehr empfindlich auf Antibiotika mit anaerobe Aktivität (Clindamycin, Metronidazol) reagiert.

    Im Gegensatz zu fakultativ aeroben und aeroben Mikroorganismen ist der diagnostische Wert der mikroskopischen Untersuchung des vaginalen Ausflusses signifikant verringert. Dies liegt zum einen daran, dass sich die pathogenen Fähigkeiten dieser Bakterien bei einer relativ geringen Menge (3-5 lg CFU / ml) manifestieren können, was mikroskopisch nicht nachgewiesen werden kann. Zweitens, selbst wenn die Morphotypen fakultativ anaerober Bakterien in Gramm gefunden werden, sind sie bei vielen Arten und Gattungen von Bakterien morphologisch gleich (dies sind coliforme Stäbchen oder grampositive Kokken). Gleichzeitig können ihre pathogenen Eigenschaften und ihre Empfindlichkeit gegenüber Antibiotika sehr unterschiedlich sein. Um den fakultativ anaeroben Teil der Mikrozönose zu charakterisieren, sowie Mikroaerophile (hauptsächlich Laktobazillen), die aufgrund ihrer Morphologie vielen obligaten anaeroben Bakterien (Clostridien, Eubakterien, Propionibakterien, etc.) ähnlich sein können, ist eine Kulturstudie notwendig - Aussaat des vaginalen Ausflusses. Für diese Zwecke wird 5% Blutagar (das universellste Medium für die meisten UPM), Saburo-Agar (zur Isolierung von Pilzen), MPC-Medium (für die Kultivierung von Laktobazillen) verwendet.

    Die Ergebnisse der Kulturstudie bieten eine Möglichkeit, die Artenzusammensetzung und das Mengenverhältnis verschiedener Spezies bei der Assoziation von Mikroorganismen, einschließlich Pilzen, und Laktobazillen zu beurteilen und damit zu bestätigen, dass die laktomorphenotypen, die durch grammatische Mikroskopie nachgewiesen wurden, zur Gattung der Laktobazillen gehören. Die Auswahl des pathologischen Materials und die Identifizierung verschiedener Spezies der Enterobacteriaceae-Familie, Staphylokokken, Streptokokken, nicht fermentierenden Bakterien, Neisseria, Corynebakterien, Pilzen und anderen Mikroorganismen nach Quantifizierung ihres Wachstums ermöglicht die Bestimmung des Grades ihrer ätiologischen Bedeutung bei der Entwicklung der Vaginitis bei einem bestimmten Patienten.

    In Fällen, in denen die Diagnose einer bakteriellen Vaginose durch Mikroskopie eines gramnegativen Abstrichs erfolgt, können die Ergebnisse der Impfung erhöhte UPM-Titer (Pilze, Enterokokken, coliforme und andere Bakterien) ergeben, die nach einer etiotropen Therapie mit Arzneimitteln mit anaerobe Aktivität Komplikationen verursachen können. Besonders zu beachten sind Mikroorganismen, die bereits in geringen Konzentrationen ein erhöhtes Risiko für den Fetus darstellen (Listeria, Streptococcus Gruppen A und B).

    Methoden zur Identifizierung von Nukleinsäuren

    Methoden zum Nachweis von DNA- und RNA-Pathogenen werden derzeit hauptsächlich zur Diagnose von Virusinfektionen eingesetzt. Methoden der Gendiagnostik basieren auf der Identifizierung von Nukleotidsequenzen direkt im pathologischen Material mit Hilfe von molekularen Sonden - künstlich abgeleiteten Nukleinsäuren, die komplementär zu viralen Nukleinsäuren sind und mit Biotin oder einer radioaktiven Markierung markiert sind.

    Ein Merkmal des PCR-Verfahrens ist das mehrfache Kopieren (Amplifikation, Replikation) unter Verwendung des DNA-Polymerase-Enzyms eines spezifischen DNA-Fragments, das aus mehreren zehn oder hunderten von Nukleotidpaaren besteht, das einzigartig ist, das heißt spezifisch für diese Art von Viruspathogen. Der Mechanismus der Replikation ist so, dass die Vervollständigung des Fragments nur in bestimmten Startblöcken beginnen kann, für deren Erzeugung in bestimmten Regionen der DNA Primer - speziell synthetisierte Oligonukleotide - verwendet werden. Primer sind komplementär zu Sequenzen innerhalb der Grenzen eines spezifischen Fragments, und die DNA-Synthese läuft nur innerhalb dieser Grenzen ab.

    Der PCR-Prozess besteht in einer großen Anzahl von Synthesezyklen (Amplifikation) eines spezifischen DNA-Fragments, der Akkumulation einer großen Anzahl von Kopien, die dann mit herkömmlichen Nachweisverfahren nachgewiesen werden können (Immunfluoreszenzanalyse, Elektrophorese).

    ● Einfachheit der Ausführung, ● Möglichkeit der vollständigen Automatisierung, ● Geschwindigkeit der Erzielung eines Ergebnisses, ● geringe Menge an pathologischem Material, das für die Forschung benötigt wird, ● Möglichkeit der Diagnose von akuten, chronischen, latenten Infektionen;

    ● Identifizierung von unfruchtbaren, persistenten Erregern.

    Die Sensitivität der PCR ist als diagnostische Methode am besten (mehrere Größenordnungen höher als bei anderen Tests). Die Spezifität der Methode ist ebenfalls hoch, aber die meisten Testsysteme sind bisher nicht zuverlässig genug, um klassische Methoden zur Diagnose selbst absoluter Pathogene zu erzwingen.

    Bei opportunistischen Infektionen kann die Bedeutung der molekulargenetischen Diagnostik noch nicht als sinnvoll erkannt werden, da der bestimmende Faktor für die Entwicklung solcher entzündlichen Prozesse der quantitative Faktor und nicht die Anwesenheit des Mikroorganismus selbst am untersuchten Ort ist.

    Gegenwärtig werden PCR-Verfahren in der Diagnose von viralen, parasitären und bakteriellen STIs häufig als primäres Screening sowie als Kontrolle der Heilung in Kombination mit anderen Methoden der Labordiagnostik verwendet. Mit der neuesten Technologie, wie Echtzeit-PCR und NASBA, ist es möglich, die genaue Menge an Virus bei HIV-Patienten zu bestimmen.

    SEROLOGISCHE DIAGNOSTISCHE METHODEN

    Methoden, die spezifische AT- und Ar-Pathogene identifizieren. Ihre Rolle ist insbesondere in Fällen wichtig, in denen die Isolierung des Pathogens erhebliche Schwierigkeiten bereitet. Wenn ein spezifisches AT nachgewiesen wird, ist es notwendig, einen Anstieg ihrer Titer festzustellen, in Verbindung mit dem paarige Seren im Abstand von 2-3 Wochen untersucht werden. Die Definition von Immunglobulinklassen beschreibt eindeutig die Stadien des infektiösen Prozesses und kann in einigen Fällen als prognostisches Zeichen für dessen Verlauf dienen.

    Von großer Bedeutung sind Methoden zum Nachweis von Ag-Pathogenen. Sie können in den frühesten Stadien des Infektionsprozesses nachgewiesen werden, was eine Expressdiagnose ermöglicht, und die quantitative Bestimmung von Ar in der Krankheitsdynamik dient als Kriterium für die Wirksamkeit der durchgeführten Behandlung.

    Serologische Methoden sind von größter Bedeutung für die Diagnose von Syphilis und HIV-Infektionen. Bei der Diagnose einer HIV-Infektion wird üblicherweise ein enzymgekoppelter Immunadsorptionstest verwendet, der es ermöglicht, bereits 1-1,5 Monate nach der Infektion positive Ergebnisse der Studie zu erhalten. Positive Screening-Ergebnisse unter Verwendung eines Enzymimmunoassays erfordern eine Bestätigung durch die Immunoblot-Methode, die die Verifizierung von Antikörpern gegen verschiedene virale Proteine ​​ermöglicht.

    In der Diagnostik der Syphilis werden derzeit verschiedene serologische Methoden eingesetzt, die den Nachweis von Antikörpern gegen verschiedene AH T. pallidum Determinanten im Körper ermöglichen. Abhängig vom verwendeten Ag werden die serologischen Reaktionen in zwei Gruppen unterteilt: Treponemal und Nicht-Treponemal. Die erste wird zum Screening verwendet. Sie sind technisch einfach, benötigen nicht viel Zeit, eine quantitative Version der Reaktion mit der Bestimmung des AT-Titers ist möglich, was es erlaubt, sie zur Beurteilung der Wirksamkeit der Behandlung zu verwenden. Diese Tests detektieren jedoch AT in den ersten 2-4 Wochen der primären Syphilis nicht, und falsch positive und falsch negative Reaktionen sind möglich.

    Treponema-Tests haben eine hohe Spezifität und erlauben, die Ergebnisse von Nicht-Treponema-Tests zu bestätigen. Treponema-Tests waren jedoch bei der Untersuchung von Liquor cerebrospinalis unzuverlässig (mit Ausnahme der direkten Hämagglutination), sie werden auch nicht als Kontrolle für die Wirksamkeit der Behandlung verwendet, und die Möglichkeit falsch-positiver Reaktionen ist nicht ausgeschlossen.

    Bei opportunistischen bakteriellen Infektionen, deren Erreger häufig mit dem argulären Ag des Wirtes vorkommen und die als schwache Stimulatoren für die Produktion spezifischer Antikörper dienen, werden serologische Diagnosemethoden praktisch nicht verwendet.

    INTERPRETATION DER ERGEBNISSE DER MIKROBIOLOGISCHEN FORSCHUNG

    BEWERTUNG DER ERGEBNISSE DER MIKROBIOLOGISCHEN FORSCHUNGEN DER ERLEICHTERTEN WEIBLICHEN GENITALORGANE

    Datenmikroskopie primärer Abstrich Material, die Ergebnisse der Direktsaat auf festen Nährböden (quantitative Schätzung des Wachstums verschiedenen Typen), als auch die klinischen Symptome der Krankheit und die Geschichte des Patienten: Bei der Beurteilung muß die Ergebnisse der mikrobiologischen Untersuchungen von getrennter weiblicher Genitalverstümmelung eines Satz von Attributen jeweils betrachtet werden. Also, bei der Untersuchung von Material aus geschlossenen Höhlen (punctates von tumorartigen Formationen im kleinen Becken, Fruchtwasser), sowie die normalerweise sterilen Organe (Inhalt der Gebärmutter, schabende Endometrium, Stücke von Organen und Geweben während der Operation entfernt), das Wachstum von Mikroorganismen, insbesondere in Monokultur, Beweise für ihre ätiologische Rolle. Bei der Untersuchung von Material aus Loci, und normalerweise mit einer Vielzahl von Mikroflora, wird großer Wert auf die Bewertung der Artenzusammensetzung, Quantifizierung des Wachstums verschiedener Spezies, die während der Primärsaatguts gezüchtet wurden, die Gleichförmigkeit der Ergebnisse mit wiederholten Studien sowie klinische Daten gelegt. Die folgenden mikrobiologischen Kriterien die vaginale microcenosis für einzelne nosologische Formen bei Frauen im gebärfähigen Alter bewerten auf der Basis einer integrierten Bewertung der Mikroskopie und Kulturstudien abnehmbare Scheide angeboten werden.

    NORMOCENOSE
    • Mikroskopie eines Gram-gefärbten Abstrichs (Abb. 6-3): ♦ Das Vaginalepithel wird durch die Zellen der Oberflächenschichten repräsentiert, Zellen der Zwischenschicht sind seltener (das Verhältnis kann je nach Phase des Menstruationszyklus variieren, Schwangere haben viele Zwischenzellen), es gibt keine "Schlüsselzellen" manchmal trifft man auf "falsche Schlüssel" -Zellen; ♦ Leukozytenreaktion fehlt oder ist schwach exprimiert; - isolierte Leukozyten im Sichtfeld; ♦ die Gesamtanzahl von Mikroorganismen ist mäßig oder groß; ♦ der vorherrschende Morphotyp ist Laktobazillen, andere Rotypen sind entweder nicht vorhanden oder ihre Anzahl wird berechnet

    einzelne mikrobielle Zellen in seltenen Sichtfeldern.

  • Kulturelle Forschung: ♦ totale mikrobielle Kontamination - 6-8 lg CFU / ml ♦ absolute Vorherrschaft der Laktobazillen;

    ♦ UPM im niedrigen Titer (weniger als 3 lg CFU / ml) oder nicht vorhanden.

    Abb. 6-3. "Schlüssel" -Zellen (Gram-Abstrich-Mikroskopie).

    BAKTERIELLE VAGINOSE
    • Mikroskopie eines Gram-gefärbten Abstrichs (Abb. 6-4): ♦ Das Vaginalepithel wird durch die Zellen der Oberflächenschichten repräsentiert, Zwischenzellen sind selten, oft "Schlüssel" -Zellen, ♦ die Leukozytenreaktion fehlt gewöhnlich, ♦ die Gesamtzahl der Mikroorganismen ist massiv, seltener - Großartig;

    ♦ Morphotypen strenger Anaerobier und Gardnerellen herrschen vor, Laktomorphotypen fehlen oder werden in allen Sichtfeldern nicht als einzelne bestimmt.

  • Kulturmethode: ♦ Gesamtkeimbelastung übersteigt 9 lg CFU / ml; polymikrobielle Mikroflora mit absoluter Prävalenz von obligat anaeroben Spezies und Gardnerella ♦ nur unter aeroben Kultivierungsbedingungen fehlt das Wachstum von Mikroorganismen oder es wird UPM-Wachstum beobachtet, oft in einem kleinen Titer;

    ♦ Es gibt kein Wachstum von Laktobazillen oder ihr Titer ist stark reduziert (weniger als 5 lg CFU / ml).

    Abb. 6-4. Bakterielle Vaginose (Gram-Abstrich-Mikroskopie).

    Vaginalkandidose

    In Abhängigkeit von der Konzentration der Pilze in der Entladung der Vagina und der begleitenden Mikroflora können 3 Formen der vaginalen Candidiasis unterschieden werden.

    • Mikroskopie Ausstrichen gefärbt durch Gramfärbung (Abbildung 6-5.): ♦ Vaginalepithel vorwiegend oberflächliche Schichten, sondern können sogar viele Zwischen- und Parabasalzellen (proportional zu der Schwere des klinischen Verlaufs der Krankheit); ♦ moderate Leukozytenreaktion (10-15 Leukozyten in Sichtfeld) zu einem ausgeprägten (30-50 oder mehr Leukozyten im Sichtfeld) ♦ die Gesamtzahl der Mikroorganismen ist moderat oder groß;

    ♦ Morphotypen von Laktobazillen dominieren, Hefezellen sind vorhanden, Fragmente von Pseudomyzel mit Blastosporen.

  • Kulturmethode: ♦ Die Gesamtanzahl von Mikroorganismen überschreitet nicht 8 lg CFU / ml. ♦ Hefepilze sind in einem Titer von mehr als 4 lg CFU / ml vorhanden.

    ♦ Lactobacilli werden in einem Titer von mehr als 6 lg CFU / ml gesät.

    Abb. 6-5. Candida-Vaginitis (Abstrichmikroskopie. Gram-gefärbt).

    Die Kombination von bakterieller Vaginose und Candida-Vaginitis.

    • Mikroskopie eines Gram-gefärbten Abstrichs (Abb. 6-6): ♦ vaginales Epithel vorwiegend auf den Oberflächenschichten, es gibt "Schlüssel" -Epithelzellen, ♦ mäßige oder starke Leukozytenreaktion, ♦ Gesamtanzahl von Mikroorganismen ist groß oder groß, ♦ Morphotypen von strengen Anaerobiern und Gardnerella sind dominant Hefezellen und / oder Fragmente des Pilzes Pseudomyzel sind vorhanden;

    ♦ Laktomorphotypen fehlen oder einzelne sind sichtbar.

  • Kulturmethode: ♦ Die Gesamtzahl der Mikroorganismen ist massiv (mehr als 9 lg KBE / ml), aber wenn nur unter aeroben Bedingungen gezüchtet wird, nehmen nur hefeartige Pilze mit mäßigen oder hohen Titern (4-7 lg KBE / ml) zu, ♦ es gibt kein Wachstum von Laktobazillen niedriger Titer (weniger als 4 lg CFU / ml);

    ♦ Mikroorganismen, die beim Pflanzen vorherrschen - Bakteroide, Prevollae, Gardnerella, anaerobe Kokken.

    Abb. 6-6. Eine Kombination aus bakterieller Vaginose und Candida-Vaginitis (Gram-Abstrich-Mikroskopie).

    Asymptomatische Beförderung von Pilzen.

    • Mikroskopie eines Gram-gefärbten Abstrichs: ♦ Das Vaginalepithel wird vorwiegend durch die Zellen der Oberflächenschichten repräsentiert ♦ Die Leukozytenreaktion wird nicht exprimiert, einzelne Leukozyten in Sicht ♦ Die Gesamtzahl der Mikroorganismen ist moderat oder groß.

    ♦ Morphotypen von Laktobazillen dominieren, Pilze offenbaren meist nicht oder finden sich in seltenen Sichtfeldern einzelner Hefezellen.

  • Kulturmethode: ♦ Die Gesamtzahl der Mikroorganismen überschreitet nicht 8 lg CFU / ml;

    NICHT-SPEZIFISCHE VAGINITIS

    Mikroskopie eines Gram-gefärbten Abstrichs (Abb. 6-7): ♦ Das Vaginalepithel wird durch oberflächliche und intermediäre Zellen dargestellt, Parabasalzellen finden sich in ausgeprägten Entzündungsprozessen ♦ die Leukozytenreaktion ist unterschiedlich ausgeprägt (mehr als 10 Leukozyten pro Sichtfeld) ♦ die Gesamtzahl Mikroorganismen sind mäßig, ♦ es gibt keine Laktobazillen oder ihre Anzahl ist stark reduziert (auf wenige im Sichtfeld);

    ♦ Morphotypen von UPM überwiegen - coliforme Stäbchen oder grampositive Kokken.

    Kulturmethode: ♦ Mangel an Wachstum von Laktobazillen oder deren Mindestmenge;

    • Wachstum von optionalem aerobem UPM, meistens ein Typ mit hoher Beschriftung.

    Abb. 6-7. Unspezifische Vaginitis (Abstrichmikroskopie, Gram-Färbung).

    ZWISCHENOPTIONSOPTION DER MIKROCENOSE
    • Mikroskopie eines Gram-gefärbten Abstrichs: ♦ Das Vaginalepithel wird durch oberflächliche Zellen repräsentiert, einzelne "Schlüssel" -Zellen können gefunden werden oder es besteht die Tendenz, diese zu bilden ♦ Die Anzahl der Leukozyten ist nicht mehr als 10 in Sicht ♦ Die Gesamtzahl der Mikroorganismen ist moderat oder groß;

    ♦ Morphotypen strikter Anaerobier und Gardnerella, kombiniert mit mäßig reduziertem Laktobazillengehalt, dominieren.

  • Kulturmethode: ♦ Die Gesamtzahl der Mikroorganismen beträgt 6-8 lg CFU / ml. ♦ Der Titer der Laktobazillen ist reduziert, kann aber moderate Werte erreichen (5-6 lg CFU / ml).

    ♦ mäßiger Titer von obligaten Anaerobiern und Gardnerella (5-7 lg CFU / ml).

    CYTOLYTISCHE VAGINOSE
    • Mikroskopie eines Gram-gefärbten Abstrichs (Abb. 6-8): ♦ Die überwiegende Mehrheit der Epithelzellen ist Zytolyse; Elemente der Zellzerstörung - Detritus, exponierte Zellkerne von Oberflächen- und Intermediärzellen herrschen in einem Abstrich vor ♦ Leukozyten fehlen oder ihre Anzahl überschreitet nicht 10 in Sicht;

    ♦ große Mengen an Mikroflora, vertreten durch typische Lactobacillus-Morphotypen.

  • Kulturmethode: ♦ Reichliches Wachstum von Laktobazillen nur;

    ♦ begleitende Mikroflora fehlt normalerweise.

    Abb. 6-8. Zytolytische Vaginose (Gram-Abstrich-Mikroskopie).

    Vaginale epiteliale ATROPHY
    • (Abb. 6-9) Mikroskopische smear gefärbt Gram: ♦ auf dem Grad der Atrophie des Epithels Vaginalschleimhaut je enthält die verschiedene Verhältnisse der Anzahl von Zwischen- und Parabasalzellen, mit dem Wachstum der Atrophie erhöht die Anzahl der parabasalen und Basalzellen; ♦ Leukozytenzahl ist in der Regel weniger als 10 in Sicht;

    ♦ Mikroflora ist praktisch nicht vorhanden; Einzelne Laktomorphotypen oder UPM-Morphotypen können in seltenen Gesichtsfeldern gefunden werden.

  • Kulturmethode: ♦ geringe mikrobielle Gesamtkontamination (2-4 lg CFU / ml);

    ♦ niedrige Titer von Laktobazillen und UPM.

    Abb. 6-9. Vaginale Epithelatrophie (Abstrichmikroskopie, Gram-Färbung).

    Bewertung der Ergebnisse der mikrobiologischen Untersuchung des Blutes

    Bei der Isolierung typischer Erreger (Staphylococcus aureus, Listeria, Klebsiella, andere coliforme Bakterien, Pseudomonas bacillus) sowie Pilzen ist sogar eine positive Hämokultur von diagnostischem Wert. Bei der Isolierung von Mikroorganismen, die als Hautsaprophyten (Koagulase-negative Staphylokokken, Diphtheroide, Mikrokokken) erkannt werden, sind zwei positive Blutkulturen erforderlich, um eine echte Bakteriämie zu bestätigen.

    BEURTEILUNG DER ERGEBNISSE DER MIKROBIOLOGISCHEN STUDIE VON URIN

    Der Grad der Bakteriurie ist das Hauptkriterium bei der Differenzierung eines infektiösen Prozesses im Harntrakt von der Kontamination des Urins mit normaler Mikroflora. Der Grad der Bakteriurie, nicht mehr als 3 lg CFU / ml, in der Regel das Ergebnis der Kontamination. Der Grad der Bakteriurie 3-4 lg CFU / ml wird als zweifelhaftes Ergebnis angesehen und die Studie sollte wiederholt werden. Der Grad der Bakteriurie, gleich und höher als 5 lg CFU / ml, zeigt das Vorhandensein eines Entzündungsprozesses an. Es ist jedoch notwendig, die Besonderheiten der klinischen Manifestationen der Erkrankung und der durchgeführten Therapie (nicht nur antibakteriell) zu berücksichtigen. Zum Beispiel, mit einer schlechten Passage von Urin, mit seiner niedrigen relativen Dichte, bei pH-Wert ist es im Urin von gesunden Menschen gefunden. Monokulturen treten häufiger bei akuten Entzündungsprozessen auf und sind mit einem hohen Grad an Bakteriurie verbunden. Assoziationen von Mikroorganismen sind häufiger in chronischen Prozessen. Bei der abschließenden Auswertung der Ergebnisse der mikrobiologischen Urinuntersuchung müssen die Daten des klinischen Bildes und anderer Laboruntersuchungen berücksichtigt werden.

    Faktoren, die das Ergebnis beeinflussen

    Die Zuverlässigkeit der mikrobiologischen Diagnostik hängt in erster Linie davon ab, ob der behandelnde Arzt die Regeln für die Aufnahme pathologischen Materials für die Forschung und die Nützlichkeit von Informationen über den Zustand des Patienten einhält, da die Wahl der Taktik der mikrobiologischen Forschung und die Interpretation der Ergebnisse von diesen Daten abhängen. Bei der Aufnahme und dem Transport von Biomaterialien für die mikrobiologische Untersuchung sind folgende Anforderungen zu beachten:

    ● Material aus der Infektionsquelle entnehmen (wo der Erreger in maximaler Menge vorhanden ist), und wenn diese Anforderung nicht erfüllt werden kann, biologische Tests im Zusammenhang mit der Infektionsquelle (Urin bei Nieren- und Blasenpathologie, Austritt aus dem Zervikalkanal bei Endometritis), ● Entlassung aus der Vagina Zervikalkanal, Urethra vor manueller vaginaler Untersuchung; Stellen Sie sicher, dass der Patient seit mindestens 3 Tagen keine lokale Behandlung mehr durchgeführt hat. ● Nehmen Sie das Material vor Beginn der antimikrobiellen Therapie und wenn es unmöglich ist, diese Anforderung zu erfüllen, unmittelbar vor der nächsten Dosis des Arzneimittels (wenn seine Konzentration minimal wird); ● befolgen Sie die Regeln der Asepsis d.h. Kontamination der Probe durch gleichzeitig auftretende transiente Mikroflora nicht zulassen. ● sterile wattierte (Dacron) Tampons und Transportmedien (Scheidenausfluss, Gebärmutterhalskanal, Wundausfluss), Behälter (Urin, Kot), Spritzen (Eiter, Exsudat), Flaschen mit Probenahme verwenden Nährmedien für Blutkulturen; Zur schnellen Diagnostik von Virusinfektionen werden Tamponbürsten verwendet, von denen das Biomaterial auf einen Glasträger übertragen oder in spezielle Transportmedien gegeben wird. ● Das aufgenommene Material möglichst schnell in ein Labor in einem geeigneten Temperaturmodus (20-37 ° C) transportieren (nicht mehr als 1-1, 5 h); Wenn diese Anforderung nicht erfüllt werden kann, Transportmedien verwenden und Proben in einem Haushaltskühlschrank aufbewahren (mit Ausnahme von Alkohol und Blut), ● wenn eine anaerobe Infektion vermutet wird, sollte das Material so weit wie möglich vor Sauerstoff geschützt werden; direkt nach der Entnahme in anaerobe Behälter oder in spezielle Transportmedien geben;

    ● Im Falle einer vermuteten Gonorrhoe-Infektion ist es vorzuziehen, die Aussaat von Material, das mit einer sterilen Plastikschlaufe entnommen wurde, auf ein dichtes selektives Medium zu richten; Dann wird die Petrischale mit der Aussaat in einen speziellen Plastikbeutel mit hohem Kohlendioxidgehalt gegeben und ins Labor geschickt.

    Zu den Faktoren, die die Zuverlässigkeit der mikrobiologischen Diagnose beeinflussen, gehören:

    ● Bedingungen für die Entnahme und den Transport von biologischem Material ● angemessene Auswahl an mikrobiologischen Forschungsmethoden ● berufliche Qualifikationen von Mikrobiologen;

    ● die Nützlichkeit von Informationen über den Zustand des Patienten, der untersucht wird, was für die Bewertung der erzielten Ergebnisse wichtig ist.

    Es ist notwendig, ständig Kontakt mit dem Labor zu halten, gemeinsame Diskussionen von Klinikern und Mikrobiologen zur sofortigen Entfernung von Behauptungen und Fragen zu führen, periodisch zu analysieren und zu bewerten, um die Arbeit zu verbessern.